Page 73 - 《中国药房》2021年2期

树豆酮酸A对人肝微粒体中5种常见细胞色素P450酶的体外抑制

作用研究

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1，2 #
1＊
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陈 瑞 ，周 维 ，张 丽 ，朱高峰 ，黄 静 ，汤 磊 （1.贵州省化学合成药物研发利用工程技术研究中心，
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贵阳 550004；2.贵州医科大学药学院，贵阳 550004）
中图分类号 R285.5 文献标志码 A 文章编号 1001-0408（2021）02-0195-06
DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2021.02.12
摘 要 目的：研究树豆酮酸A对人肝微粒体中的5种细胞色素P450 （CYP）酶的体外抑制作用。方法：采用Cocktail探针药物法，
在人肝微粒体中加入 50.0、15.0、5.0、1.5、0.5、0.15、0.05 μmol/L 的树豆酮酸 A，与混合探针药物[包含非那西丁、右美沙芬、奥美拉
唑、睾酮、甲苯磺丁脲（分别为CYP1A2、CYP2D6、CYP2C19、CYP3A4、CYP2C9的探针药物）]共同孵育60 min。在另设空白组和
阳性对照组[α-萘黄铜、奎尼丁、（+）-N-3-苄基香酚、酮康唑、磺胺苯吡唑（分别为CYP1A2、CYP2D6、CYP2C19、CYP3A4、CYP2C9
的特异性抑制剂）]的基础上，以葛根素为内标，采用超高效液相色谱-质谱联用法（UPLC-MS/MS）分析相应代谢产物（对乙酰氨基
酚、右啡烷、5-羟基奥美拉唑、6β-羟基睾酮、羟基甲苯磺丁脲）的含量。以ACQUITY UPLC BEH C18为色谱柱，以0.01％甲酸水溶
®
液-0.01％甲酸乙腈为流动相（梯度洗脱），柱温为40 ℃，流速为0.4 mL/min，进样量为2 μL；采用电喷雾电离源，以多反应监测模式
进行正负离子扫描，数据采集范围为m/z 100～1 200，碰撞气为氩气，雾化气为氮气，锥孔气流量为50 L/h，脱溶剂气流量为800 L/h，
正、负离子模式下毛细管电压分别为 2.0、1.5 kV，离子源温度分别为 120、110 ℃，脱溶剂的温度分别为 400、450 ℃。使用 Graph-
pad Prism 5.0 软件进行非线性回归分析并计算半数抑制浓度（IC50 ）。结果：上述各代谢产物检测浓度的线性范围分别为 0.26～
8.35、0.36～34.56、0.10～3.09、3.67～117.37、0.15～4.88 μmol/L（R ＞0.99），定量下限分别为0.26、0.36、0.10、3.67、0.15 μmol/L。阳
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性对照组特异性抑制剂对人肝微粒体中 CYP1A2、CYP2D6、CYP2C19、CYP3A4、CYP2C9 酶的 IC50均在文献报道的可接受范围
内。树豆酮酸A对人肝微粒体中CYP1A2、CYP2D6、CYP3A4酶的IC50值均大于50 μmol/L，对CYP2C9、CYP2C19酶的IC50值分别
为4.94、18.00 μmol/L。结论：树豆酮酸A对人肝微粒体中CYP1A2、CYP2D6、CYP3A4酶没有抑制作用，对CYP2C9、CYP2C19酶
有一定的抑制作用。
关键词 树豆酮酸A；人肝微粒体；细胞色素P450酶；Cocktail探针药物法；超高效液相色谱-质谱联用法；特异性抑制剂；抑制作用

Inhibitory Effects of Cajanonic Acid A on 5 Kinds of Common CYP450 Enzyme in Human Liver
Microsomes in vitro
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CHEN Rui ，ZHOU Wei ，ZHANG Li ，ZHU Gaofeng ，HUANG Jing ，TANG Lei （1.Guizhou Provincial
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1
1，2
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Engineering Technology Research Center for Chemical Drug R&D，Guiyang 550004，China；2. College of
Pharmacy，Guizhou Medical University，Guiyang 550004，China）
ABSTRACT OBJECTIVE：To study the inhibitory effects of cajanonic acid A on 5 kinds of cytochrome P450（CYP）enzyme，in
human liver microsomes in vitro. METHODS：By Cocktail probe substrate method，50.0，15.0，5.0，1.5，0.5，0.15，0.05 μmol/L
cajanonic acid A were added into liver microsomes， and incubated with mixed probe substrates [including phenacetin，
dextromethorphan，omeprazole，testosterone and toluenesulfonbutylurea （probe substrates of CYP1A2，CYP2D6，CYP2C19，
CYP3A4，CYP2C9，respectively）]. On the basis of setting up blank group and positive control group [ α-naphthalene brass，
quinidine，（+）-N-3-benzyl vanillin，ketoconazole and sulfabendazole （specific inhibitors of CYP1A2，CYP2D6，CYP2C19，
CYP3A4，CYP2C9，respectively）]，using puerarin as internal standard，UPLC-MS/MS method was adopted to determine the
contents of corresponding metabolites （acetaminophen， dextrophane， 5-hydroxy omeprazole， 6 β-hydroxytestosterone，
hydroxytolbutamide）. The determination was performed on ACQUITY UPLC BEH C18 column，with mobile phase consisted of
®
0.01％ formic acid aqueous solution-0.01％ acetonitrile formic acid（gradient elution）at the flow rate of 0.4 mL/min. The column
temperature was 40 ℃，and the sample size was 2 μL. An electrospray ionization source was used to conduct positive and negative
ion scanning in the multiple reaction monitoring mode. The data acquisition range was m/z 100-1 200，the collision gas was argon，
the atomized gas was nitrogen，the gas flow rate of the cone hole was 50 L/h，the desorption gas flow rate was 800 L/h，the
capillary voltage under positive and negative mode was 2.0，
Δ 基金项目：国家自然科学基金资助项目（No.81660573）；贵州省
1.5 kV，and the ion source temperature was 120 ℃，110 ℃，
科技计划项目（No.黔科合支撑〔2017〕2842，No.黔科合支撑〔2017〕2839）
respectively. The desolvent temperature were 400 ℃ and
＊讲师，硕士。研究方向：药动学与药物质量控制。电话：
0851-86908318。E-mail：464268222@qq.com 450 ℃ ， respectively. Non linear regression analysis was
# 通信作者：教授，博士生导师，博士。研究方向：药物研发设计、 performed by using Graphpad Prism 5.0 software and IC50 was
合成与药动学。电话：0851-86908318。E-mail：2317972657@qq.com calculated. RESULTS：The linear ranges of above metabolifes

中国药房 2021年第32卷第2期 China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 2 ·195 ·