Page 68 - 《中国药房》2021年2期

Anchang decoction low-dose，medium-dose and high-dose groups（1，5，10 mL，each milliliter is approximately equivalent to 0.11
g of total crude drug），with 15 rats in each group. Other groups were given TNBS combined with ethanol enema to establish UC
model rat，except blank group was given normal saline. Two days after successful modeling，blank group and model group were
given normal saline 5 mL，administration groups were given relevant medicine intragastrically，once a day，for consecutive 14 d.
After last medication，HE staining was used to observe the pathological change of colon tissue in rats. Western blotting assay was
used to detect the protein expression of TLR4，TRAF6 and NF-κB in colon tissues of rats；Real-time fluorescent quantitative PCR
was used to detect mRNA expression of TLR4，TRAF6，TNF-α and NF-κB；ELISA assay was adopted to detect serum level of
TNF-α，IL-6 and FC in stool samples. RESULTS：Compared with blank group，the colonic mucosa of model group was severely
damaged，and the protein expression of TLR4，TRAF6 and NF-κB，mRNA expression of TLR4，TRAF6，TNF-α and NF-κb as
well as serum levels of TNF-α，IL-6 and FC level in stool samples were increased significantly（P＜0.05）. Compared with model
group，the pathological changes of colon tissue in rats were improved in different administration groups to different extents，and
above indexes were all decreased significantly（P＜0.05）. CONCLUSIONS：Anchang decoction may relieve the inflammation of
UC model rats by regulating the TLR4/NF-κB signaling pathway and the expression of FC.
KEYWORDS Ulcerative colitis；Anchang decoction；TLR4；TRAF6；NF-κB；Fecal calprotectin

溃疡性结肠炎（Ulcerative colitis，UC）以反复腹泻、 公司）、配套蛋白转印模块（湿转）及PowerPac Basic型电
排脓血便、身体消瘦、发热等炎症症状为主要临床表现， 泳仪（美国Bio-Rad公司）、TD4型普通离心机（上海卢湘
[1]
其病情反复、难以治愈，逐渐成为近年来研究的热点 。 仪离心机仪器有限公司）、DW-86L728J型医用低温保存
Toll 样受体 4（TLR4）/核因子κB（NF-κB）信号通路被认 箱（青岛海尔特种电器有限公司）、FC-1100 型超微量核
为是促进炎症因子释放的重要途径，当该通路被激活 酸 检 测 仪（青 岛 爱 普 科 生 物 工 程 有 限 公 司）、
时，促炎因子[如肿瘤坏死因子α（TNF-α）和白细胞介素1 G8830-64001型实时荧光定量聚合酶链式反应（PCR）仪
（IL-1）等]得以表达，并参与机体炎症反应、免疫应答等 （美国 Agilent 公司）、50I 型生物显微镜（日本 Nikon 公
过程 [2－3] 。李姿慧等 研究证实，参苓白术散能够抑制 司）、Tanon-5200 型凝胶成像仪（上海天能科技有限公
[4]
UC模型大鼠NF-κB相关蛋白的表达，下调血清TNF-α、 司）、HED-SY96S 型酶标仪（山东霍尔德电子科技有限
IL-6 及 IL-1β的表达水平，从而对大鼠的结肠黏膜起到 公司）。
保护作用，说明 NF-κB 信号通路与 UC 的炎症反应密切 1.2 药品与试剂
相关。 安肠汤方药的组成为补骨脂 25 g、黄芪 20 g、党参
安肠汤是广西中医药大学肖振球教授治疗UC的经
15 g、白头翁15 g、茯苓15 g、槟榔15 g、熟附子15 g、地榆
验方。肖教授认为，UC属中医“痢疾”范畴，该病易反复
15 g、赤芍 15 g、鸡内金 10 g、薏苡仁 10 g、干姜 10 g、白
发作，迁延日久，致脾肾阳虚为主，湿毒瘀邪停滞胃肠为
术 10 g、木香 10 g、延胡索 10 g、甘草 10 g，用 2 000 mL
标，强调正虚邪恋为根本，因此创立安肠汤扶正祛邪 。
[5]
水煎，分 2 次口服，每日 1 剂。安肠汤原药材依据 2015
本课题组前期研究发现，安肠汤能显著改善 UC 模型大
年版《中国药典》（一部） 进行炮制，并由广西中医药大
[7]
鼠的疾病状态，减弱其巨噬细胞吞噬能力，改善大鼠肠
学附属第一医院药剂科加工制备（原药材全部购自广
道微生态，降低血清内毒素；同时还发现，粪钙卫蛋白
东康美药业股份有限公司，经广西中医药大学附属第
（FC）在UC模型大鼠急性炎症期表达量上升，可用于评
一医院药学部陈超副主任药师鉴定为真品）。双歧杆
价肠道的炎症反应情况 。那么其作用的机制是否与
[6]
菌活菌胶囊[阳性对照药，国药准字 S10960040，批号
TLR4/NF-κB信号通路相关，目前尚无相关报道。为此，
C13201000927，规格 0.35 g（含 0.5 亿活菌）]购自丽珠集
本研究以 UC 模型大鼠为研究对象，拟通过探究安肠汤
干预对模型大鼠结肠组织中TLR4、TNF受体关联因子6 团丽珠制药厂。本实验用药处方及用量全部经过广西
（TRAF6）、TNF-α、NF-κB mRNA 以及相关蛋白表达水 中医药大学附属第一医院药学部审核。
平的影响，阐明该方通过调控 TLR4/NF-κB 信号通路及 水 合 氯 醛 溶 液（批 号 2013101801）、甲 醛（批 号
FC水平以达到防治UC的药效作用机制，为其临床应用 20130817）均购自成都市科龙化工试剂厂；Takara 反转
提供依据。 录试剂（批号AI80462A）购自宝日医生物技术（北京）有
1 材料 限 公 司 ；Triquick Reagent 总 RNA 提 取 试 剂（批 号
1.1 仪器 20200212）、高 效 RIPA 组 织/细 胞 裂 解 液（ 批 号
本文所用的仪器有：T18型组织匀浆机（德国IKA公 69067530）、蛋 白 酶 抑 制 剂 混 合 液（100 × PIC）（批 号
司）、TU-100C型恒温金属浴锅（上海一恒科学仪器有限 P6730）、脱脂奶粉（批号EZ5619C137）、三羟甲基氨基甲
公司）、单道移液器和5418R型低温离心机（德国Eppen- 烷盐酸盐缓冲液（TBST，批号70015639）、BCA蛋白浓度
dorf公司）、一次性使用真空采血管（江西精致科技有限 测定试剂盒（批号PC0020）均购自北京索莱宝科技有限

·190 · China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 2 中国药房 2021年第32卷第2期