Page 74 - 《中国药房》2021年2期

were 0.26-8.35，0.36-34.56，0.10-3.09, 3.67-117.37，0.15-4.88 μ mol/L（R ＞0.99）. The limits of quantitation were 0.26，0.36，
2
0.10，3.67，0.15 μ mol/L，respectively. The IC50 values of specific inhibitors in positive control group to CYP1A2，CYP2D6，
CYP2C19，CYP3A4 and CYP2C9 in human liver microsomes were all within the acceptable range reported in the literature. The
IC50 values of cajanonic acid A to CYP1A2，CYP2D6 and CYP3A4 in human liver microsomes were all more than 50 μmol/L，and
the IC 50 values of CYP2C9 and CYP2C19 were 4.94 and 18.00 μmol/L，respectively. CONCLUSIONS：Cajanonic acid A has no
inhibitory effect on CYP1A2，CYP2D6 and CYP3A4，but has a certain inhibitory effect on CYP2C9 and CYP2C19.
KEYWORDS Cajanonic acid A；Human liver microsome；Cytochrome P450 entyme；Cocktail probe substrate method；UPLC-MS/
MS；Specific inhibitor；Inhibition effect

树豆酮酸 A（Cajanonic acid A，结构式见图 1）是从 型高速离心机（香港基因有限公司）、KH-600E型超声波
豆科植物树豆 Cajanus cajan（Linn.）Millsp.中提取的一 清洗器（昆山禾创超声仪器有限公司）、优普系列超纯水
[1]
种菧类化合物 。已有研究表明，该化合物具有降血糖 机（四川优普超纯科技有限公司）、FA805N 型十万分之
活性，对2型糖尿病（T2DM）具有良好治疗作用，而且体 一电子天平（上海菁海仪器有限公司）、DW-86L486型超
内、体外研究均证实其对过氧化物酶体增殖物激活受 低温保存箱（海尔集团公司）。
体γ（PPARγ）和蛋白酪氨酸磷酸酶1B（PTP1B）具有抑制 1.2 药品与试剂
作用 [2－4] ，且可能是通过抑制胰岛素抵抗和降低体质量 树豆酮酸 A 对照品（批号 20181226，纯度＞98％）
来治疗T2DM [5－6] ；同时，其还可降低血清总胆固醇、三酰 由贵州医科大学药物化学重点实验室制备，葛根素对照
[7]
甘油和低密度脂蛋白胆固醇水平 。由此可见，树豆酮 品（内标，批号 528C021，纯度＞98％）、烟酰胺腺嘌呤二
酸A具有重要的开发价值。 核苷酸磷酸二钠（NADP-Na2，批号 718B0225，纯度≥

OH O 98％）、葡萄糖-6-磷酸-二钠（G-6-P-Na2，批号116B039，纯
度≥98％）、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G-6-P- DH，批 号
OH
20160725，纯度 90％）、磷酸盐缓冲液（PBS，浓度 0.01
O mol/L，pH7.4，批号 409L024）均购自北京索莱宝科技有
限公司，右美沙芬对照品（批号01155029-75469A，纯度≥
O
98％）购自上海泰坦科技股份有限公司，非那西丁对照
品（批号 81105，纯度＞98％）购自美国 Sigma 公司，奥美
图1 树豆酮酸A的结构式 拉唑、甲苯磺丁脲、睾酮、对乙酰氨基酚、（+）-N-3- 苄基香
Fig 1 Structural formula of cajanonic acid A 酚、奎尼丁、磺胺苯吡唑、酮康唑和α-萘黄酮等对照品（批

号 100367-201305、 100369-201307、 L31J8T40939、
药物代谢的主要场所是肝脏，其中细胞色素 P450
（CYP）酶为主要的代谢酶，其亚型 CYP1A2、CYP2D6、 SJ0711GA14、L27J9B64115、J09M6B1、A22M10L83645、
CYP2C19、CYP2C9、CYP3A4参与了体内80％以上的药 100294-201203、B20083，纯度≥98％）均购自上海源叶
物代谢 。CYP 酶是一个多功能的酶系，在体内具有 生物科技有限公司，右啡烷对照品（批号 FK-J1795，纯
[8]
可诱导性和可抑制性 [9－10] 。该酶与药物的相互作用能 度＞98％）购自上海樊克生物科技有限公司，羟基甲苯
够在所有的体内过程（包括吸收、分布、代谢和排泄）中 磺丁脲、5-羟基奥美拉唑、6β-羟基睾酮等对照品（批号
发生，其中以代谢过程最为突出，约占40％ [11－12] 。可见， 1-PSB-27-2、1-PSB-27-2、KIT0635，纯度≥98％）均购自
研究药物对CYP酶的影响具有重要意义，也是药物临床 加拿大TRC公司；甲酸、甲醇、乙腈均为色谱纯，氯化镁、
前研究的重要步骤，可为后期研究提供其抑制效果与诱 柠檬酸钠等其余试剂均为分析纯或实验室常用规格，水
导效果的相关信息。肝微粒体法是研究体外药物代 为蒸馏水。
谢的常用方法，该方法具有操作简单、重复性好等的特 1.3 其他
点 。基于此，本研究采用肝微粒体法，运用Cocktail探 男性健康蒙古利亚人种肝微粒体购自武汉普莱特
[13]
针药物法和超高效液相色谱-串联质谱法（UPLC-MS/ 生物医药有限公司，批号为M10001.2017003。
MS）考察树豆酮酸 A 对人肝微粒体中 5 种常见 CYP 酶 2 方法与结果
的体外影响，旨在为后续该化合物的临床前研究或新药 2.1 树豆酮酸A和内标溶液的制备
研发提供参考依据。 精密称取树豆酮酸A对照品适量，用甲醇溶解并定
1 材料 容，配制成质量浓度为 2.8 mmol/L 的贮备液；取葛根素
1.1 仪器 对照品适量，同法制得质量浓度为 4 μg/mL 内标溶液。
本文所用仪器如下：Xevo G2-XS 型超高效液相色 上述溶液均于4 ℃下保存，备用。临用前，将树豆酮酸A
谱-四极杆串联飞行时间质谱仪（美国 Waters 公司）、X1 贮备液用甲醇稀释，配制成质量浓度分别为 50.0、15.0、

·196 · China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 2 中国药房 2021年第32卷第2期