Page 70 - 《中国药房》2021年2期
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cDNA 置于－80 ℃冰箱内保存，待用。RT-PCR 反应体
系为 MonAmp TM SYBR Green qPCR Mix 10 μL，cDNA
®
1 μL，正向引物（10 μmol/L）0.4 μL，反向引物（10 μmol/L）
0.4 μL，H2O 8.2 μL；反应条件为 95 ℃预变性 30 s；95 ℃
变性10 s，60 ℃退火30 s，共40个循环。以GAPDH作为
内参，采用 2 －ΔΔCt 法计算各目标基因 mRNA 的表达水平
（式中Ct表示荧光信号强度达到设定阈值时经历的循环 A.空白组 B.模型组
次数）。引物序列详见表1。
表 1 TRAF 6、NF-κB、TNF-α基因 PCR 引物序列与产
物长度
Tab 1 PCR Primer sequence and product lenght of
TRAF 6，NF-κB，TNF-α gene
基因名称 序列 产物长度，bp
TRAF6 正向：5′-CGTGAGGATCACCATTGCCT-3′ 296 C.阳性对照组 D.安肠汤低剂量组
方向：5′-GTTGGCAACCACATGACCAC-3′
NF-κB 正向：5′-ACAGAGGAAACGCCAGAAGC-3′ 183
方向：5′-AATGCAATCCCACCGTAAGC-3′
TNF-α 正向：5′-GGCCACCACGCTCTTCTGTC-3′ 152
方向：5′-GGGCTACGGGCTTGTCACTC-3′
2.3.4 各组大鼠血清中相关炎症因子以及粪便样品中
FC 水平检测 采用 ELISA 法。取“2.2”项下血清/粪便
E.安肠汤中剂量组 F.安肠汤高剂量组
样品适量，参照 ELISA 试剂盒说明书进行操作，检测各
图 1 安肠汤对大鼠结肠组织形态影响的显微图（HE染
组大鼠血清中TNF-α、IL-6以及粪便样品中FC的水平。
色，×200）
2.4 统计学方法
Fig 1 Micrographs of the effects of Anchang decoc-
采用SPSS 18.0软件对数据进行统计分析。计量资
tion on the morphology of colonic tissue in rats
料以 x±s 表示，多组间比较采用单因素方差分析，两组
（HE staining，×200）
间比较采用 SNK-q 检验。P＜0.05 为差异有统计学
表2 安肠汤对大鼠结肠组织中TLR4、TRAF6、NF-κB
意义。
蛋白表达的影响（x±±s，n＝15）
3 结果
Tab 2 Effects of Anchang decoction on the protein ex-
3.1 各组大鼠结肠组织的病理改变
pression of TLR4，TRAF6 and NF-κB in colo-
与空白组比较，模型组大鼠结肠组织黏膜表面严重
nic tissue of rats（x±±s，n＝15）
缺损，可见深达肌层的溃疡坏死。经药物治疗后，安肠
组别 TLR4 TRAF6 NF-κB
汤低剂量组大鼠结肠组织黏膜表面较模型组稍有改善， 空白组 1.01±0.12 0.83±0.08 1.24±0.13
但仍可见炎症细胞浸润；而安肠汤中、高剂量组以及阳 模型组 3.04±0.14 ＊ 2.58±0.16 ＊ 3.16±0.22 ＊
阳性对照组 1.97±0.11 # 1.69±0.14 # 2.35±0.14 #
性对照组大鼠结肠组织恢复明显，其黏膜表面可见新生
安肠汤低剂量组 2.33±0.21 # 1.95±0.16 # 2.11±0.16 #
腺体且排列较整齐。详见图1。 安肠汤中剂量组 1.68±0.12 # 1.67±0.13 # 1.86±0.15 #
3.2 各组大鼠结肠组织中 TLR4、TRAF6、NF-κB 蛋白 安肠汤高剂量组 1.54±0.09 # 1.50±0.11 # 1.77±0.14 #
＊
#
表达水平 注：与空白组比较，P＜0.05；与模型组比较，P＜0.05
Note：vs. blank group，P＜0.05；vs. model group，P＜0.05
＊
#
与空白组比较，模型组大鼠结肠组织中 TLR4、
TRAF6、NF-κB 蛋白的表达水平均显著升高（P＜0.05）； 3.4 各组大鼠血清中TNF-α、IL-6及粪便样品中FC的
与模型组比较，各药物组大鼠结肠组织中上述指标的表 水平
达水平均显著降低（P＜0.05），详见表2、图2。 与空白组比较，模型组大鼠血清中TNF-α、IL-6及粪
3.3 各 组 大 鼠 结 肠 组 织 中 TLR4、TRAF6、TNF-α 、 便样品中 FC 水平均显著升高（P＜0. 05）；与模型组比
NF-κB mRNA表达水平 较，各药物组大鼠血清/粪便中上述指标水平均显著降低
与空白组比较，模型组大鼠结肠组织中 TLR4、 （P＜0.05），详见表4。
TRAF6、TNF-α、NF-κB mRNA 表达水平均显著升高 4 讨论
（P＜0. 05）；与模型组比较，各药物组大鼠结肠组织中上 目前，UC 的病因和发病机制仍未明确，但近年的
述指标的表达水平均显著降低（P＜0. 05），详见表3。 研究热点聚焦在免疫炎症反应的相关通路上，如NF-κB
·192 · China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 2 中国药房 2021年第32卷第2期
