Page 111 - 《中国药房》2021年2期

2，3，5，4′-四羟基二苯乙烯基葡萄糖苷、淫羊藿苷、汉黄 素 、汉 黄 芩 素 的 相 对 保 留 时 间 分 别 为 0.526、1.164、
芩苷、黄芩素、汉黄芩素的相对校正因子，结果见表3。 1.261、1.643、1.893，其 RSD 分 别 为 6.52％ 、0.97％ 、
表3 以黄芩苷为基准峰计算的其余5种成分的相对校 1.61％、2.66％、2.56％（n＝13）。
[7]
正因子（多点校正法） 2.8.2 保留时间差值法 参考文献方法 ，利用相对保
Tab 3 Relative correction factors of other 5 compo- 留时间及二极管阵列检测器测定的紫外吸收光谱对各
nents calculated with baicalin as reference 组分进行定位及确认，以各待测组分色谱峰与黄芩苷色
peak（multi- point correction method） 谱峰的保留时间的差值计算相对保留时间。以黄芩苷
进样量，μL RSD， 为基准峰，计算得“2.6.6”项不同测试条件下 2，3，5，4′-
待测成分 平均值
0.5 1 2 5 10 15 ％ 四羟基二苯乙烯基葡萄糖苷、淫羊藿苷、汉黄芩苷、黄芩
2，3，5，4′-四羟基二苯乙烯基葡萄糖苷 1.188 1.188 1.186 1.188 1.186 1.096 1.172 3.171
淫羊藿苷 0.523 0.527 0.522 0.525 0.531 0.538 0.528 1.181 素、汉黄芩素的相对保留时间分别为－7.886、2.712、
汉黄芩苷 1.441 1.48 1.467 1.475 1.491 1.521 1.479 1.797 4.343、10.697、14.864，其 RSD 分 别 为 3.21％ 、3.15％ 、
黄芩素 1.763 1.791 1.804 1.822 1.856 1.884 1.820 2.419 2.68％、1.35％、1.46％（n＝13）。
汉黄芩素 2.534 2.487 2.506 2.526 2.55 2.597 2.534 1.506
对比两种方法结果的RSD值发现，保留时间差值法
2.7.2 斜率校正法 参考文献方法 [3－4] ，标准曲线回归
计算的相对保留时间的精密度总体更高，故后续以保留
方程 y＝ax+b 中，x＝（y－b）/a＝y/a－b/a，由于 b 值通常
时间差值法对待测组分进行定位。
为误差所致，在 a/b 值大于 100 时，b/a 值可以忽略不计，
2.9 含量测定比较
此时可以直接用 x＝y/a 计算含量。校正因子可以二者
取 10 批扶正固本颗粒，按“2.2”项下方法制备供试
的斜率a之比直接计算，相对校正因子计算公式为：
品溶液，再按“2.1”项下色谱条件进样测定，分别用外标
fk/s＝ ak … … … … … … … … … … … … … … … … … ③ 法和两种一测多评法测定或计算2，3，5，4′-四羟基二苯
as
乙烯基葡萄糖苷、黄芩苷、淫羊藿苷、汉黄芩苷、黄芩素、
待测成分质量浓度计算公式为：
汉黄芩素的含量，再计算 RSD 值；以及两种一测多评法
Ak
ck′＝ … … … … … … … … … … … … … … … ④ 的测定结果分别与外标法的Pearson相关系数（r），上述
as ·fk/s
统计学处理均由SPSS 22.0软件完成，结果见表5。
两式中，as 为参照物质斜率；ak 为其他对照组分
由表 5 结果显示，两种一测多评法与外标法所得各
斜率。
待测成分含量的 RSD 分别为 2.77％、2.58％、0.14％、
以黄芩苷为基准峰，将“2.6.1”项下 6 种待测成分回
0.51％、0.96％、0.29％，两者相关性好（r均不低于0.999 9，
归方程的相应数据，代入公式③计算 2，3，5，4′-四羟基
P＜0.001），说明两种一测多评法与外标法结果基本
二苯乙烯基葡萄糖苷、淫羊藿苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉
一致。
黄芩素的相对校正因子，结果见表4。
表4 以黄芩苷为基准峰计算的其余5种成分的相对校 3 讨论
正因子（斜率校正法） 本研究选择 2，3，5，4′-四羟基二苯乙烯基葡萄糖
Tab 4 Relative correction factors of other 5 compo- 苷、黄芩苷、淫羊藿苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素等 6
nents calculated with baicalin as reference 种成分进行一测多评分析研究，其成分主要来源于黄
peak（slope correction method） 芩、淫羊藿、何首乌等3味中药，是扶正固本颗粒的主要
药效成分 [9－11] 。在前期试验过程中，本课题组曾对何首
待测成分 斜率 相对校正因子
2，3，5，4′-四羟基二苯乙烯基葡萄糖苷 2 378.8 1.234 乌中的毛蕊花糖苷、大黄素、大黄酸、大黄素甲醚、大黄
淫羊藿苷 1 060.7 0.550 酚、淫羊藿中的宝藿苷Ⅰ，女贞子中的女贞苷和特女贞
汉黄芩苷 3 006.7 1.559
黄芩素 3 739.7 1.939 苷，茜草中的大叶茜草素、羟基茜草素等成分进行检测，
汉黄芩素 5 136.3 2.664 发现毛蕊花糖苷、女贞苷、特女贞苷、大叶茜草素、羟基
2.8 待测组分色谱峰定位 茜草素等成分在该色谱条件下未被检出，大黄素、大黄
2.8.1 相对保留时间法 参考文献方法 [7－8] ，利用相对 酸、大黄素甲醚、大黄酚、宝藿苷Ⅰ等成分在该色谱条件
保留时间及二极管阵列检测器测定的紫外吸收光谱对 下响应较低，故选择了成分含量相对较高且分离度较好
各组分进行定位及确认，以各待测组分色谱峰与黄芩苷 的6种成分。
色谱峰的保留时间之比计算相对保留时间。以黄芩苷 一测多评法的两个关键问题：（1）对各成分的定
为基准峰，计算得“2.6.6”项不同测试条件下 2，3，5，4′- 位。本文比较了相对保留时间和保留时间差值两种较
四羟基二苯乙烯基葡萄糖苷、淫羊藿苷、汉黄芩苷、黄芩 为简单的方法对各成分进行定位的效果。结果显示，保

中国药房 2021年第32卷第2期 China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 2 ·229 ·