Page 114 - 《中国药房》2021年2期
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醚、6，7-二甲氧基香豆素、东喘宁、蒿属香豆精等，具有                         子κBα激酶抑制蛋白（IκBα）、磷酸化IκBα（p-IκBα）单克
        平喘止咳、抗辐射、抑制免疫、舒张血管、调血脂、消炎镇                          隆 抗 体（批 号 分 别 为 sc-8008、sc-166748、sc-1643、
        痛和降血压等功效，临床上主要用于支气管哮喘、心绞                            sc-8404）均购自美国 Santa Cruz 公司；底物化学发光
        痛及冠心病等症的治疗 。近年来，滨蒿内酯在非酒精                           （ECL）试剂购自环亚生物科技有限公司；氯化钠注射液
                             [1]
        性脂肪性肝病的治疗中表现出较好的效果，具有减轻肝                           （国药准字 H20033128，规格 200 mL∶ 1.8 g；作生理盐水
        组织脂肪性改变等作用，逐渐得到人们的重视 。体外                            用）购自山东华鲁制药有限公司；其余试剂均为市售分
                                                 [2]
        研究证实，滨蒿内酯能通过使转化生长因子β（TGF-β）/                        析纯，水为蒸馏水。
        Smad信号通路失活，进而抑制肝星状细胞的增殖，表明                          1.3 动物
                                          [3]
        其具有潜在的治疗肝纤维化的作用 。D-半乳糖胺                                 实验所用动物为清洁级昆明种小鼠，雄性，体质量
        （D-GalN）/脂多糖（LPS）诱导的肝损伤模型的病理改变                      20～22 g，购于北京华阜康生物科技股份有限公司，生产
        与人类病毒性肝炎的病理改变较为接近，研究人员也发                            许可证号为SCXK（京）2014-0004。
        现，滨蒿内酯可以通过抑制Toll样受体4（TLR-4）介导的                      2 方法
        炎症通路来减轻 D-GalN/LPS 诱导的小鼠肝损伤 。四                      2.1 分组与给药
                                                   [4]
        氯化碳（CCl4 ）可破坏肝组织，导致脂质过氧化及炎症反                            将50只小鼠随机分为正常对照组、模型组、水飞蓟素
        应，是肝损伤研究中广泛使用的经典造模化合物；同时，                           组（120 mg/kg）和滨蒿内酯高、低剂量组（60、30 mg/kg），
        核因子κB（NF-κB）信号通路在 CCl4致小鼠急性肝损伤                      每组10只。其中，水飞蓟素给药剂量参考文献[7]设置，
        引起的炎症反应中发挥了重要作用                 [5－6] 。因此，本研究       滨蒿内酯给药剂量参考文献[4]并结合本课题组前期预
        以CCl4致急性肝损伤模型小鼠为研究对象，在进一步证                          实验结果设置；药物均以 0.5％羧甲基纤维素钠溶液为
        实滨蒿内酯对模型小鼠肝损伤具有保护作用的基础上，                            溶剂配制成适宜浓度给药。各给药组小鼠均灌胃给药，
        着重探讨该作用与氧化应激、炎症反应及NF-κB通路的                          灌胃体积为2 mL/100 g，每日1次，连续给药7 d；正常对
        相关性，初步阐明滨蒿内酯的肝保护作用机制，为将其                            照组和模型组小鼠同法灌胃等体积0.5％羧甲基纤维素
        开发成为肝损伤防治药物奠定实验基础。                                  钠溶液。末次给药结束 2 h 后，模型组和各药物组小鼠
        1 材料                                                均一次性腹腔注射0.1％CCl4溶液（以市售橄榄油为溶剂
        1.1  仪器                                             稀释），注射体积为1 mL/100 g；正常对照组小鼠腹腔注
            实验使用的仪器有：ESJ200-4A型电子天平（沈阳龙                     射等体积橄榄油。
        腾电子有限公司）、HC-2518RHC型高速冷冻离心机（安徽                      2.2  血清中AST、ALT活性检测
        中科中佳科学仪器有限公司）、CX31型生物显微镜（日本                             小鼠腹腔注射CCl4溶液或等体积橄榄油18 h后，摘
        Olympus公司）、L5型紫外-可见分光光度计（上海仪分科                      眼球取血，血样以 3 000 r/min 离心 5 min，分离上层血
        学仪器有限公司）、HBS-1096A型酶标分析仪（南京德铁                       清。将血清分装于EP管中，于－20 ℃保存。检测前，取
        实验设备有限公司）、LF-Mini4型垂直电泳槽、LF-ZY02                    部分冻存血清，室温解冻后，采用 ELISA 法以酶标分析
        型转印槽（北京龙方科技有限公司）、ChemiDoc XRS+型                     仪检测 AST、ALT 活性，操作步骤严格按照相应试剂盒
        全自动凝胶成像分析系统（美国Bio-Rad公司）等。                          说明书进行。
        1.2  药品与试剂                                          2.3  肝组织病理学检测
            滨蒿内酯对照品（批号 20180215，纯度＞95.0％）购                      摘眼球取血结束后，颈椎脱臼处死小鼠并于无菌条
        自成都普利斯生物科技有限公司；水飞蓟素对照品（阳                            件下分离其肝组织。取部分肝组织（其余部分冻存，备
        性对照，批号 0171204，纯度＞98.0％）购自盘锦格林恩                     测），置于4％福尔马林溶液固定24 h，石蜡包埋，切片（8
        生物资源开发有限公司；羧甲基纤维素钠（批号s14016）                        μm），再经HE法染色后，置于生物显微镜下观察小鼠肝
        购自上海源叶生物科技有限公司；CCl4 （分析纯）购自上                        组织病理性改变情况。
        海阿拉丁生化科技股份公司；丙氨酸转氨酶（ALT）、天                          2.4  血 清 中 SOD、CAT 活 性 及 MDA、IL-1 β 、IL-6、
        冬氨酸转氨酶（AST）、白细胞介素1β（IL-1β）、IL-6、肿瘤                  TNF-α含量检测
        坏死因子α（TNF-α）、超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢                          取“2.2”项下冻存血清，室温解冻后，采用 ELISA 法
        酶（CAT）、丙二醛（MDA）酶联免疫吸附法（ELISA）检测                     以酶标分析仪检测小鼠血清中 SOD、CAT 活性以及
        试剂盒（批号分别为 180325、180124、180613、180417、              MDA、IL-1β、IL-6、TNF-α含量，操作步骤严格按照相应
        180903、180419、180525、180716）均购自南京建成生物               试剂盒说明书进行。
        工 程 研 究 所 ；苏 木 精 - 伊 红（HE）染 色 试 剂 盒（批 号             2.5 肝组织中NF-κB通路相关蛋白表达的检测
        PC0020）、二喹啉甲酸（BCA）蛋白定量检测试剂盒（批号                          采用蛋白免疫印迹法进行检测。取“2.3”项下冻存
        G1120）、辣根过氧化物酶（HRP）标记的山羊抗兔IgG二                      的剩余肝脏组织，室温解冻后，加入生理盐水制备 10％
        抗（批号 PC8020）均购自北京索莱宝科技有限公司；小                        肝组织匀浆液，以3 000 r/min离心5 min，取组织匀浆上
        鼠 NF-κB p65、磷酸化 NF-κB p65（p-NF-κB p65）、核因           清液。采用 BCA 蛋白定量检测试剂盒进行蛋白定量


        ·232 ·  China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 2                                    中国药房    2021年第32卷第2期
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