Page 39 - 《中国药房》2020年22期
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分子聚合物，是由谷氨酸重复单元通过α-氨基与γ-羧基                         （FT-IR）仪（美国 Nicolet 公司）；Unity 500MHz 型核磁共
        之间的酰胺键连接而成，是一种可生物降解、无毒、无免                          振（NMR）仪（美国 Varian 公司）；Vario ELⅢ型元素分析
        疫源性的药物载体        [10-11] 。γ-聚谷氨酸的分子链上具有活            仪（德国Elementar公司）；HF212UV型CO2培养箱（香港
        性较高的侧链羧基，易与一些抗癌药物形成高分子药物                           力康生物医疗科技控股集团）；ELX800 型酶标仪（美国
        复合体，具有良好的药动学特性，能通过高渗透长滞留                           BioTek公司）。
        效应（Enhanced permeability and retention effect，EPR）使  1.2 药品与试剂
                            [12]
        药物在肿瘤组织中积累 。可见，γ-聚谷氨酸是一类较                              蛇葡萄素原料药（张家界生力生物有限公司，批号：
        理想的体内药用高分子材料。基于此，本课题组将蛇葡                           160726，纯度：＞98.5％）；γ-聚谷氨酸原料药（分子量：约
        萄素连接在γ-聚谷氨酸的羧基端以合成γ-聚谷氨酸蛇葡                         2×10 Da，南京轩凯生物科技有限公司，批号：20181004，
                                                                6
        萄素酯（γ-PGA-AMP），并对合成产物进行表征和抗肿瘤                      纯度：＞92％）；透析袋（透过分子量：8 000～14 000 Da，
        活性评价，旨在提高蛇葡萄素的抗肿瘤活性，并为符合                           美 国 联 合 碳 化 物 公 司）；RPMI-1640 培 养 基（批 号 ：
        临床需求抗肿瘤新药的研发提供参考，为肿瘤治疗提供                           2016-12）、胎牛血清（批号：2017-09）、青-链霉素双抗（批
        新的选择。蛇葡萄素、γ-聚谷氨酸和γ-PGA-AMP的结构                      号：2017-05）均购自美国 Gibco 公司；MTT 试剂（北京索
        式见图1。                                              莱宝科技有限公司，批号：20160922）；5⁃氟尿嘧啶原料

                                                           药（5-FU，美 国 Selleck 公 司 ，批 号 ：s1209，纯 度 ：
                                  HO
                                       OH                  99.97％）；二环己基碳二亚胺（DCC，批号：20170314，化
                                   3′ 4′
                                    5′                     学纯）、4-二甲氨基吡啶（DMAP，批号：20160701，分析
                    HO       O          OH
                        7                                  纯）、盐 酸（批 号 ：20161018，分 析 纯）、二 甲 基 亚 砜
                         5    3
                                 OH                        （DMSO，批 号 ：20160610，分 析 纯）、乙 醚（批 号 ：
                         OH  O
                                                           20160518，分析纯）均购自国药集团化学试剂有限公司；
                            A.蛇葡萄素
                                                           G 25×75 型硅胶 G 薄层层析制备板（粒径：100～200 目，
             O   OH                     O   OH
                                   O                       青岛海洋化工有限公司）；其余试剂均为分析纯或实验
                               b
                         NH  a   c                         室常用规格，水为去离子水。
                                                   OH
           H2N                        NH                   1.3  细胞
                                     n
                      O                          O             人乳腺癌细胞 MCF-7、人肝癌细胞 HepG2、人肺癌
                          O    OH
                            B. γ-聚谷氨酸                      细胞A549等细胞株均由福建医科大学药学院实验中心
            O    OH                     O   OH             提供，其原代细胞购自中国科学院上海生命科学研究院
                                   O
                        NH    b                            细胞资源中心。
                            a   c
                                                   OH
          H2N                         NH                   2 方法与结果
                                     n                     2.1  小分子γ-聚谷氨酸的制备
                     O                    HO     O
                          O   O                                             [13]
                                               OH              参考文献方法 ，首先，纯化大分子γ-聚谷氨酸原料
                                           3′ 4′
                                            5′             药：取γ-聚谷氨酸原料药 100 g，用水 500 mL 溶解，加入
                                     O         OH
                                7                          无水乙醇 1 500 mL，静置得到γ-聚谷氨酸沉淀；取沉淀，
                                 5    3
                                         OH                用去离子水 500 mL 重新溶解、超滤，除去不溶物，再次
                                OH   O                     加入无水乙醇1 500 mL沉淀后，对所得沉淀进行冷冻干
                           C. γ-PGA-AMP
                                                           燥，即得白色块状大分子γ-聚谷氨酸。其次，采用高温降
        图1   蛇葡萄素、γ-聚谷氨酸和γ-PGA-AMP的结构示意
                                                           解法降解大分子γ-聚谷氨酸：取上述大分子γ-聚谷氨酸
             图
                                                           10 g，用水配制成 2％（下同）的水溶液，用盐酸调 pH 至
        Fig 1 Structure of ampelopsin，poly（γ-glutamic acid）
                                                           2～3，高温高压（121 ℃、0.1 MPa）处理20 min后，立即冰
              and γ-PGA-AMP
                                                           浴冷却；用 NaOH 调 pH 至 7～8，冷冻干燥，即得白色棉
        1 材料                                               絮状小分子γ-聚谷氨酸钠盐。最后，制备小分子γ-聚谷
        1.1 仪器                                             氨酸：用水配制2％的小分子γ-聚谷氨酸钠盐水溶液，用
            FD-1C-50型冷冻干燥机（北京博医康实验仪器有限                     盐酸调pH至2.0左右，用水透析48 h，冷冻干燥后，即得
        公司）；DF-101S型集热式磁力搅拌器（常州国华仪器有                       白色絮状小分子γ-聚谷氨酸。
        限公司）；1835型乌氏黏度计（毛细管内径：0.5 mm，上海                    2.2 γ-PGA-AMP的合成
        隆拓仪器设备有限公司）；UV-2450 型紫外-可见分光光                          取蛇葡萄素0.59 g（约1.8 mmol）溶于DMSO 20 mL
        度计（日本 Shimadzu 公司）；740SX 型傅里叶红外光谱                  中，于室温下搅拌溶解，加入DCC 0.37 g（约1.8 mmol）、


        中国药房    2020年第31卷第22期                                            China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 22  ·2721 ·
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