Page 35 - 《中国药房》2020年22期

显色后，于490 nm波长处测定吸光度并按标准曲线法计 2.5 炮制工艺的优化
算样品含量。结果，总多糖含量（以D-无水葡萄糖计）的 2.5.1 试验设计 根据星点设计原理 [15-16] ，并结合预试
RSD为1.52％（n＝6），表明方法重复性良好。 验结果，以蒸制时间（A）、烘制时间（B）、烘制温度（C）为
1.5 自变量，二苯乙烯苷、游离蒽醌（大黄素、大黄素甲醚含
量合计值）、总多糖含量为指标；同时，结合加权评分法，
参考相关文献 [6-7，9] 及前期预试验结果进行权重处理，最
1.0
终确定综合评分计算公式为：Y＝Y1×30/Y （1max）+Y2×30/
Y （2max） －Y3×40/Y （3max） 。式中，Y为综合评分，Y1为各样品检
吸光度 0.5
1 测所得游离蒽醌含量，Y2为各样品检测所得多糖含量，Y3
为各样品检测所得二苯乙烯苷含量，Y （nmax） 为检测所得相
2
应成分含量的最大值；综合评分越高表示主要药效成分
0 3
（游离蒽醌、总多糖）含量越高、毒性成分（二苯乙烯苷）
[8]
含量越低 。采用 Design-Expert 7.0.1.0 软件进行 3 因素
－0.5
300 400 500 600 700 5 水平试验设计（α＝1.732），因素与水平见表 4，试验方
波长，nm 案与结果见表5。
注：1. 供试品溶液（编号：S5）；2. 阴性对照溶液；3. 对照品溶液
表4 因素与水平
Note：1. test sample（No. S5）；2. negative control；3. substance
control Tab 4 Factors and levels
图3 总多糖含量测定的紫外吸收光谱图 因素
水平
Fig 3 UV absorption spectra of content determina- A，h B，h C，℃
tion of total polysaccharide －1.732 3. 8. 50.
－1 3.42 8.85 54.23
2.4.8 稳定性试验 取“2.4.2”项下供试品溶液（编号： 0 4. 10. 60.
S5，星点设计序号：5）适量，按“2.4.4”项下方法显色，分 1 4.58 11.15 65.77
1.732 5. 12. 70.
别于室温下放置 0、2、4、6、8、10、12、24 h 时于 490 nm 波
表5 试验方案与结果
长处测定吸光度。结果，D-无水葡萄糖吸光度的RSD为
Tab 5 Test scheme and results
0.82％（n＝8），表明供试品溶液于室温下放置 24 h 内稳
因素 二苯乙烯苷， 游离蒽醌， 总多糖， 综合评分，
定性良好。 试验号
A，h B，h C，℃ ％ ％ ％ 分
2.4.9 加样回收率试验 精密称取已知含量的“2.1”项 1 －1. －1. －1. 1.90 0.21 26.17 18.55
2 1. －1. －1. 1.44 0.20 28.22 24.56
下何首乌九蒸九晒样品（编号：S5，星点设计序号：5）粉
3 －1. 1. －1. 1.58 0.22 30.78 32.92
末 1 g，共 6 份，按“2.4.2”项下方法制备供试品溶液；取 1 4 1. 1. －1. 0.98 0.21 35.85 28.41
mL，置于具塞比色管中，加入D-无水葡萄糖对照品溶液 5 －1. －1. 1. 1.66 0.21 32.19 26.15
6 1. －1. 1. 0.95 0.20 40.29 38.97
适量，按“2.4.4”项下方法显色后，于 490 nm 波长处测定 7 －1. 1. 1. 1.50 0.21 37.25 30.96
吸光度并计算加样回收率，结果见表3。 8 1. 1. 1. 0.96 0.20 40.69 39.89
9 －1.732 0. 0. 2.46 0.20 42.33 19.66
表3 D-无水葡萄糖的加样回收率试验测定结果（n＝6）
10 1.732 0. 0. 1.60 0.20 44.86 32.62
Tab 3 Results of recovery tests of D-anhydrous glu- 11 0. －1.732 0. 2.60 0.20 44.58 18.84
12 0. 1.732 0. 2.20 0.21 48.55 28.89
cose（n＝6）
13 0. 0. －1.732 2.88 0.20 45.15 15.16
已知含量，mg 加入量，mg 测得量，mg 加样回收率，％ 平均加样回收率，％ RSD，％ 14 0. 0. 1.732 1.94 0.18 44.75 25.23
3.808 9 3.690 0 7.500 5 100.04 15 0. 0. 0. 2.50 0.21 46.28 21.68
3.895 1 3.690 0 7.578 9 99.83 16 0. 0. 0. 2.50 0.21 46.28 21.68
3.806 8 3.690 0 7.516 1 100.52 100.41 0.87 17 0. 0. 0. 2.50 0.21 46.28 21.68
3.779 1 3.690 0 7.450 9 99.51 18 0. 0. 0. 2.50 0.21 46.28 21.68
3.870 5 3.690 0 7.581 3 100.56 19 0. 0. 0. 2.50 0.21 46.28 21.68
3.785 2 3.690 0 7.548 1 101.98 20 0. 0. 0. 2.50 0.21 46.28 21.68
2.4.10 样品含量测定 取 20 批“2.1”项下何首乌九蒸 2.5.2 模型拟合 根据表 5 结果，以综合评分（Y）为因
九晒样品粉末适量，按“2.4.2”项下方法制备供试品溶 变量，采用Design-Expert 7.0.1.0软件进行多元非线性回
液，再按“2.4.4”项下方法显色后，于 490 nm 波长处测定 归拟合，得二次多项式方程为 Y＝21.68+3.26A+2.95B+
吸光度并按标准曲线法计算样品含量。 3.50C － 1.80AB + 2.53AC － 1.56BC + 2.75A + 2.00B +
2
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中国药房 2020年第31卷第22期 China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 22 ·2717 ·