Page 58 - 2020年19期

pre-SREBP-1
n-SREBP-1
β-actin Arg335
空白对 25-HC组 GAC2低 GAC2中 GAC2高
照组 剂量组 剂量组 剂量组 Ala332
A. SREBP-1
Arg330
pre-SREBP-2
n-SREBP-2
β-actin
空白对 25-HC组 GAC2低 GAC2中 GAC2高
照组 剂量组 剂量组 剂量组
B. SREBP-2
p-S6K
S6K
β-actin
空白对 雷帕霉素 GAC2低 GAC2中 GAC2高
照组 组 剂量组 剂量组 剂量组
C. p-S6K/S6K
图4 GAC2与S6K蛋白的对接模式图
图 3 GAC2 对 HL-7702 细胞中 S6K/SREBPs 通路相关
Fig 4 Docking mode of GAC2 with S6K protein
蛋白表达影响的电泳图
Fig 3 Electrophoretograms of the effects of GAC2 on GAC2高剂量组细胞中TC含量以及洛伐他汀组和GAC
protein related to S6K/SREBPs signaling path- 中、高剂量组细胞中TG含量均较空白对照组显著降低，
way in HL-7702 cells 且GAC2可不同程度地减少细胞中的脂质堆积。
同时，本研究以 SREBPs 经典抑制剂 25-HC 为阳性
表 6 GAC2 对 HL-7702 细胞中 S6K/SREBPs 通路相关
对照，从转录水平评价了 GAC2 对 SREBPs 荧光素酶活
蛋白表达的影响（x±±s，n＝3） 性的影响，并采用实时荧光定量PCR法检测了GAC2对
Tab 6 Effects of GAC2 on the expression of protein
SREBPs 及下游脂质合成关键基因 mRNA 表达的影响。
related to S6K/SREBPs signaling pathway in
结果显示，25-HC组和GAC2各剂量组细胞中的SREBPs
HL-7702 cells（x±±s，n＝3）
荧光素酶相对活力以及各给药组细胞中 HMGCS1、
组别 n-SREBP-1 n-SREBP-2 p-S6K/S6K MVK、SCD、HMGCR 基 因 mRNA，25-HC 组 细 胞 中
空白对照组 1.00±0.10 1.00±0.06 1.00±0.11
25-HC组 0.51±0.11 ＊ 0.64±0.07 ＊ - DHCR7基因mRNA，GAC2高剂量组细胞中SREBP-2基
雷帕霉素组 - - 0.22±0.048 ＊＊ 因mRNA，25-HC组和GAC2高剂量组细胞中DHCR24、
GAC2低剂量组 0.40±0.12 ＊ 0.73±0.17 0.60±0.08 ＊ MSMO1基因mRNA的相对表达量均较空白对照组显著
GAC2中剂量组 0.39±0.10 ＊ 0.68±0.07 0.63±0.08 ＊
GAC2高剂量组 0.22±0.09 ＊＊ 0.53±0.13 ＊ 0.46±0.05 ＊＊ 降低。值得注意的是，HMGCR 是 SREBPs 下游调控胆
[26]
＊
＊＊
注：与空白对照组比较，P＜0.05， P＜0.01 固醇内源性合成的限速酶靶基因 。故笔者推测，
Note：vs. blank control group，P＜0.05， P＜0.01 GAC2 与 SREBPs 抑制剂 25-HC 的降脂作用机制可能是
＊＊
＊
相似的，即通过抑制胆固醇的生物合成从而减少脂质的
MVK、SCD、HMGCR、SREBP-2、DHCR7、DHCR24、
生成。
[24]
MSMO1 等脂质合成关键基因的转录 。有研究指出，
为进一步明确GAC2的降脂作用机制，本研究分别
SREBPs 的转录活性主要受上游 S6K 蛋白磷酸化的影
以 SREBPs 经典抑制剂 25-HC、S6K 经典抑制剂雷帕霉
[19]
响 ，当机体营养过剩时，作为调控蛋白生成及葡萄糖
素为阳性对照，评价了 GAC2 对 SREBP、S6K 蛋白表达
平衡维持的重要蛋白激酶S6K被磷酸化，从而促使下游
的影响。结果显示，25-HC 组和 GAC2 各剂量组细胞中
SREBPs剪切入核，最终导致脂质合成增多而诱发肥胖、
n-SREBP-1 蛋白的相对表达量，25-HC 组和 GAC2 高剂
胰岛素抵抗以及高脂血症 。
[25]
量组细胞中 n-SREBP-2 蛋白的相对表达量以及雷帕霉
基于S6K/SREBPs通路在调节脂质平衡中的重要作 素组和GAC2各剂量组细胞中p-S6K/S6K比值均较空白
用，本课题组对GAC2体外降脂作用及可能机制进行了 对照组显著降低。这提示 GAC2 可能通过抑制肝细胞
初步探讨。首先，本研究采用 MTT 法检测了 GAC2 对 内 S6K 蛋白的磷酸化，使得下游核内 n-SREBPs 合成减
HL-7702 细胞活力的影响，明确了低、中、高剂量 GAC2 少，进而抑制SREBPs下游调控脂质合成相关靶基因的转
对细胞均无明显毒性。同时，以HMGCR竞争性抑制剂 录来发挥降脂作用。此外，分子对接结果显示，GAC2可
洛伐他汀为阳性对照，评价了 GAC2 对 HL-7702 细胞药 通过氢键与S6K的氨基酸残基（Arg335、Arg330、Ala332）
效学指标（TC、TG）的影响。结果显示，洛伐他汀组和 结合，进一步证实了S6K可能是GAC2的作用靶点。

·2356 · China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 19 中国药房 2020年第31卷第19期