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0.01）；the number of lipid droplets in the cells of all medication groups decreased. Compared with blank control group，relative
        viability of SREBPs luciferase in 25-HC group，GAC2 low-，medium- and high-dose groups were decreased significantly；mRNA
        expression of HMGCS1，MVK，SCD，HMGCR gene in 25-HC group and GAC2 medium-，high-dose groups，mRNA expression of
        DHCR7 gene in 25-HC group，mRNA expression of SREBP-2 gene in GAC-2 high-dose group as well as mRNA expression of
        DHCR24 and MSMO2 gene in 25-HC group and GAC2 high-dose group were all decreased significantly；relative protein expression
        of n-SREBP-1 in 25-HC group，GAC2 low-，medium- and high-dose groups，relative protein expression of n-SREBP-2 in 25-HC
        group and GAC2 high-dose group as well as p-S6K/S6K ratio in rapamycin group and GAC2 groups were decreased significantly
        （P＜0.05 or P＜0.01）. The molecular docking results showed that GAC2 could bound to amino acid residues Arg335，Arg330 and
        Ala332 of S6K via hydrogen bond. CONCLUSIONS：GAC2 can reduce the lipid level of HL-7702 cells，which may be associated
        with inhibiting the expression of S6K/SREBPs signaling pathway.
        KEYWORDS     Ganoderic acid C2；S6K/SREBPs signaling pathway；Lipid metabolism；HL-7702 cells


            据成人血脂相关数据统计结果显示，2016年我国人
        群血脂异常的患病率约为 40.4％，预计到 2030 年，血清
        胆固醇水平的异常升高将导致我国心血管病事件增加
        约920万例 。高血脂症与动脉血管粥样硬化、脑梗死、
                  [1]
        心肌梗死、2型糖尿病等多种疾病的发生密切相关，已严
        重威胁到人们的生活健康            [2-3] 。目前，临床首选的降脂药
        物以他汀类为主，主要包括洛伐他汀、普伐他汀、阿托他
        汀、辛伐他汀等，可通过竞争性抑制 3-羟基 3-甲基戊二                                     图1    GAC2化学结构式
        酰辅酶A还原酶（HMGCR）来阻断细胞内的羟基甲戊酸                                  Fig 1  Chemical structure of GAC2
                                          [4]
        代谢通道，从而有效抑制胆固醇的合成 。然而，随着临
        床研究的不断深入，学者发现他汀类药物在发挥降脂作                            Thermo Fisher Scientific公司）；SW-CJ-ZF型超净工作台
        用的同时，还具有诱发肝损伤、肌肉毒性（肌病、肌炎及                          （苏州苏洁净化设备有限公司）；Eclipset S100 型倒置显
        横纹肌溶解）、糖尿病、胃肠道反应等毒副作用                    [5-7] ，使得  微镜（日本 Nikon 公司）；Microfuge 20R 型冷冻离心机
        其应用受到一定限制。因此，寻找安全、有效的降脂药                           （美国Beckman Coulter公司）。
        物成为医学研究的热点之一。固醇调节元件结合蛋白                             1.2  药品与试剂
        （SREBPs）是脂质从头合成的关键转录因子，其下游基                             GAC2 对照品（成都普菲德生物技术有限公司，批
        因 FAS、HMGCR 是游离脂肪酸和胆固醇内源性合成的                        号：150320，纯度：≥98％）；25-羟基胆固醇（25-HC）对照
        关键限速酶的编码基因，也是降脂药物研发的关键靶                             品（批号：H1015，纯度：≥98％）、美伐他汀对照品（批号：
          [8]
        点 。核糖体S6蛋白激酶（S6K）是SREBPs上游丝氨酸/                      M2537，纯度：≥98％）、洛伐他汀对照品（批号：M2147，
        苏氨酸蛋白激酶，可调控 SREBPs 的剪切及其进入细胞                        纯度：≥98％）、雷帕霉素对照品（批号：R0395，纯度：≥
        核的过程，从而促进游离脂肪酸、胆固醇合成限速酶[脂                           98％）均购自美国 Sigma 公司；青-链霉素双抗、MTT 试
                                        [9]
        肪酸合成酶（FAS）]和HMGCR的表达 。                              剂、胰酶、二喹啉甲酸（BCA）蛋白浓度试剂盒（北京索
            临床实践表明，灵芝具有较好的降脂作用 。灵芝                          莱宝科技有限公司，批号分别为 20191126、725C056、
                                                [10]
        酸 C2（GAC2，分子式为 C30H46O7，化学结构式见图 1）是                 20191128、PC0020）；胎牛血清、F-12K Nutrient Mixture
        灵芝的主要成分之一，具有增强免疫力、抗肿瘤、抗病毒                           培 养 基（美 国 Gibco 公 司 ，批 号 分 别 为 42G3279K、
        等 药 理 活 性   [11-12] 。 基 于 此 ，本 研 究 拟 以 人 肝 细 胞      1930074）；尼罗红染液（上海麦克林生化科技有限公司，
        HL-7702为对象，初步探讨GAC2的体外降脂作用，并基                       批号：C10558414）；低脂蛋白血清（LPDS，美国 Kalen
        于 S6K/SREBPs 通路探讨其降脂的可能机制，以期为灵                      Biomedical公司，批号：BS042101）；RIPA裂解液（上海碧
        芝活性成分研究及其临床应用提供参考。                                  云天生物技术有限公司，批号：P0013B）；Poly Jet体外转
        1 材料                                                染试剂（深圳恩科生物科技有限公司，批号：20191126）；
        1.1 仪器                                              细胞总胆固醇（TC）、三酰甘油（TG）含量测定试剂盒
            FLUOstar OPTIMA 型多功能酶标仪（德国 BMG                 （北京普利莱基因技术有限公司，批号分别为 E1015、
        Labtech 公司）；Gel Doc XR 型全能型凝胶成像仪（美国                 E1013）；鼠源 SREBP-1 单克隆抗体（美国 Santa Cruz 公
        Bio-Rad公司）；7500 Fast型实时荧光定量聚合酶链式反                   司，批号：sc-13551）；兔源 SREBP-2 多克隆抗体（英国
        应（PCR）仪（美国 ABI 公司）；Series Ⅱ Water Jackxet 型         Abcam 公司，批号：ab30682）；兔源 S6K 单克隆抗体、兔
        CO2 细胞培养箱、Multiskan GO 型全波长酶标仪（美国                   源磷酸化核糖体S6蛋白激酶（p-S6K）单克隆抗体（美国


        ·2352 ·  China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 19                                 中国药房    2020年第31卷第19期
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