Page 61 - 2020年19期

anterior muscle （TA） were weighed；TA cross-sectional area was determined；protein synthesis and decomposition metabolism
ability of TA were detected；mRNA expressions of Bcl-2，Bax and Caspase-3 in TA were detected by Real-time PCR；protein
expressions of muscular dystrophin Fbox-1 （Atrogin-1），myofloin-1 （MuRF-1），Rho-related protein kinase 1 （ROCK1），
phosphorylated PTEN（p-PTEN），phosphatidylinositol-3-kinase（PI3K）and phosphorylated Akt（p-Akt）in TA were detected by
Western blotting. RESULTS：Compared with the sham operation group，the body weight，TA wet weight，protein synthesis
metabolism ability of TA as well as protein expressions of PI3K and p-Akt were decreased significantly in model group（P＜0.05）；
the cross-sectional area of TA decreased significantly（P＜0.05）；protein decomposition metabolism ability of TA，Bax/Bcl-2 ratio，
Caspase-3 mRNA expression，protein expressions of Atrogin-1，MuRF-1，ROCK1 and p-PTEN were increased significantly（P＜
0.05）. Compared with model group，above indexes of mice were all improved significantly in Sijunzi decoction medium-dose，
high-dose groups and Compound α-ketoacid tablets group（P＜0.05）. CONCLUSIONS：Sijunzi decoction can increase the body
weight of CKD-PEW model mice and alleviate the skeletal atrophy；the mechanism may be related to regulating ROCK1/PTEN/Akt
signaling pathway activity，inhibiting the expression of Atrogin-1 and MuRF-1.
KEYWORDS Sijunzi decoction； Chronic kidney disease； Protein energy wasting； Rho-related protein kinase 1； PTEN；
Phosphatidylinositol-3-kinase；Akt；Mice

慢性肾脏病（Chronic kidney disease，CKD）是一个 ABI公司）；Mini-Sub Cell GT Cell型电泳仪和转膜仪（美
严重的公共健康问题，其发病率逐年增高，且有年轻化 国Bio-Rad公司）。
的趋势 。CKD常伴有多种代谢性紊乱，其中将近50％ 1.2 药品与试剂
[1]
的患者会出现营养不良，导致蛋白质能量消耗（Protein 四君子汤（由辽宁中医药大学附属医院药剂科提
energy wasting，PEW），主要表现为肌肉萎缩、体质量下 供，批号：201801014，规格：每 1 mL 含生药量为 0.5 g）；
降、血清白蛋白水平降低等，这不仅影响了患者的生存 复方α-酮酸片（北京费森尤斯卡比医药有限公司，批号：
质量、降低了其治疗耐受性，而且还是造成CKD患者死 U1430，规格：0.63 g/片）；酪蛋白（广东捷倍斯生物科技
[2]
亡的主要诱因之一 。中医学认为，CKD 归属“水肿” 公司，批号：201803214）；Masson 染色试剂盒（北京索莱
“慢肾风”“尿血”“腰痛”等范畴，病机主要与脾、肾、肺有 宝生物技术有限公司，批号：20190623）；B淋巴细胞瘤2
[3]
关 。有研究认为，CKD以脾、肾亏虚为主，脾虚导致阳 （Bcl-2）、Bcl-2 相关 X 蛋白（Bax）、胱天蛋白酶 3（Cas-
气不升、谷气下流，因此 CKD 的中医治疗多以健脾为
pase-3）、β-肌动蛋白（β-actin）引物购于上海生工生物技
主 。
[4]
术有限公司；HiFiScript cDNA 第一链合成试剂盒、Ultra-
四君子汤是益气健脾的代表方剂，出自《太平惠民
SYBR Mix（北京康为世纪生物技术有限公司，批号：
和剂局方》，由人参、茯苓、白术和甘草4味中药组成。本
201712135-01、201801012-03）；兔源肌萎缩蛋白 Fbox-1
课题组前期将四君子汤应用于脾肾两虚型CKD患者的
（Atrogin-1）、肌环指蛋白1（MuRF-1）、ROCK1、PTEN、磷
[5]
治疗，发现其可明显改善 CKD 患者 PEW 状态 ，但是其
酸化 PTEN（p-PTEN）、PI3K、Akt、磷酸化 Akt（p-Akt）、
作用机制尚未阐明。近年来的研究发现，Rho相关蛋白
β-actin抗体（美国CST公司，批号：CST4041T、CST6367T、
激酶1（ROCK1）/人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力
CST4035T、CST9188S、CST9551S、CST4249S、CST582-
蛋白同源的基因（PTEN）/蛋白激酶 B（Akt）信号通路具
95S、CST9614S、CST4970S）；总蛋白提取试剂盒、二喹啉
有调节 CKD-PEW 模型骨骼肌发育与蛋白质代谢的能
甲酸（BCA）蛋白定量试剂盒（北京碧云天生物技术有限
力，其主要组成蛋白ROCK1、PTEN、磷脂酰肌醇-3-激酶
公司，批号：121017200621、0106201700628）；辣根过氧
（PI3K）及Akt的活性变化对CKD-PEW疾病进展具有重
要影响，是CKD患者PEW状态的潜在干预靶点 [6-7] 。鉴 化物酶（HRP）标记山羊抗兔 IgG 二抗（北京中杉金桥生
于此，本课题组拟通过研究四君子汤对 CKD-PEW 模型 物技术有限公司，批号：2018001005）；酪氨酸标准品（美
14+
小鼠骨骼肌 ROCK1/PTEN/Akt 信号通路及其下游蛋白 国Sigma公司，批号：209-113-1，纯度：99％）； C-苯丙氨
的影响，探讨其改善CKD相关PEW的可能作用机制，为 酸（中国原子能科学研究院）；其他试剂均为国产分析纯
四君子汤用于CKD-PEW患者的治疗提供参考。 或实验室常用规格，水为蒸馏水。
1 材料 1.3 动物
1.1 仪器 SPF 级 C57BL/6 雄性小鼠 80 只，6～8 周龄，体质量
Triathler 型液体闪烁及发光测定仪（京乐自然基因 18～20 g，购于湖南斯莱克景达实验动物有限公司[生产
生命科学有限公司）；Ti-S 型荧光倒置显微镜（日本 许可证号：SCXK（湘）2016-0002]。小鼠饲养于辽宁中
Nikon 公司）；RM2235 型石蜡切片机（德国 Leica 公司）； 医药大学实验动物中心实验室[恒温（22±4）℃、恒湿
7500 型实时荧光定量-聚合酶链式反应（PCR）仪（美国 （60±5）％、明暗时间各12 h]，自由饮食。本研究实验方

中国药房 2020年第31卷第19期 China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 19 ·2359 ·