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灵芝酸C2调控S6K/SREBPs信号通路对肝细胞脂代谢的影响及

机制研究 Δ

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蒋亚丽 ，袁 永 ，董 帅 ，高 改 ，赵建平 ，王 辉 （1.河南中医药大学药学院，郑州 450046；2.河南中医
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药大学中医药科学院，郑州 450046）
中图分类号 R285.5 文献标志码 A 文章编号 1001-0408（2020）19-2351-08
DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2020.19.09
摘 要 目的：研究灵芝酸C2（GAC2）的体外降脂作用，并基于核糖体S6蛋白激酶（S6K）/固醇调节元件结合蛋白（SREBPs）信号
通路探讨其可能机制。方法：以人肝细胞HL-7702为对象，采用MTT法考察低、中、高剂量（5、10、20 μmol/L，下同）GAC2作用后
细胞的相对活力；以洛伐他汀为阳性对照，采用酶联免疫吸附测定法检测低、中、高剂量GAC2作用后细胞中胆固醇（TC）、三酰甘
油（TG）的含量，并采用尼罗红染色法观察细胞内的脂质堆积情况；转染SREBPs报告基因质粒后，以25-羟基胆固醇（25-HC）为阳
性对照，采用荧光素酶报告基因法检测低、中、高剂量GAC2作用后细胞中SREBPs荧光素酶的相对活性；以25-HC为阳性对照，采
用实时荧光定量聚合酶链式反应法检测中、高剂量GAC2作用后细胞中SREBPs及其下游基因mRNA的表达情况；以SREBPs抑
制剂（25-HC）、S6K抑制剂（雷帕霉素）为参照，采用Western blotting法检测细胞中SREBP-1、SREBP-2的表达情况[以成熟SREBPs
（n-SREBPs）表示]以及磷酸化S6K与S6K的相对表达量比值（p-S6K/S6K比值）；利用AutoDock 4.0等软件对S6K与GAC2进行分
子对接。结果：低、中、高剂量GAC2对细胞相对活力无显著影响（P＞0.05）。与空白对照组比较，洛伐他汀组和GAC2高剂量组细
胞中TC含量以及洛伐他汀组和GAC2中、高剂量组细胞中TG含量均显著降低（P＜0.05或P＜0.01），各给药组细胞中的脂滴均有所
减少。与空白对照组比较，25-HC组和GAC2低、中、高剂量组细胞中的SREBPs荧光素酶相对活性均显著降低；25-HC组和GAC2中、
高剂量组细胞中HMGCS1、MVK、SCD、HMGCR基因mRNA，25-HC组细胞中DHCR7基因mRNA，GAC2高剂量组细胞中SREBP-2基
因mRNA，25-HC组和GAC2高剂量组细胞中DHCR24、MSMO2基因mRNA的相对表达量均显著降低；25-HC组和GAC2低、中、高
剂量组细胞中 SREBP-1 蛋白的相对表达量，25-HC 组和 GAC2 高剂量组 n-SREBP-2 蛋白的相对表达量以及霉帕霉素组和GAC2
各剂量组p-S6K/S6K比值均显著降低（P＜0.05或P＜0.01）。分子对接结果显示，GAC2可通过氢键与S6K的氨基酸残基Arg335、
Arg330、Ala332结合。结论：GAC2可降低HL-7702细胞的脂质水平，其调控作用可能与抑制S6K/SREBPs信号通路的表达有关。
关键词 灵芝酸C2；核糖体S6蛋白激酶/固醇调节元件结合蛋白信号通路；脂代谢；HL-7702细胞

Study on the Effect and Mechanism of Ganoderic Acid C2 on Lipid Metabolism of Hepatocytes by
Regulating S6K/SREBPs Signaling Pathway
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JIANG Yali ，YUAN Yong ，DONG Shuai ，GAO Gai ，ZHAO Jianping ，WANG Hui（1. School of Pharmacy，
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Henan University of TCM，Zhengzhou 450046，China；2. Academy of Chinese Medicines，Henan University of
TCM，Zhengzhou 450046，China）
ABSTRACT OBJECTIVE：To study in vitro lipid-lowering effect of ganoderic acid C2（GAC2），and to investigate its potential
mechanism on the basis of S6K/SREBPs signaling pathway. METHODS：Using human liver cells HL-7702 as objects，MTT assay
was used to test relative cell viability after treated with low，medium and high doses（5，10，20 μmol/L，hereinafter）of GAC2.
Using lovastatin as positive control，ELISA method was used to detect the contents of TC and TG in cells after treated with low，
medium and high doses of GAC2. Nile red staining was used to observe the accumulation of lipids in cells. After transfected
SREBPs report gene plasmid，using 25-HC as positive control，relative viability of SREBPs luciferase in cells were determined by
luciferase assay after treated with low，medium and high doses of GAC2. Using 25-HC as positive control，real-time fluorescent
quantitative PCR was used to measure the mRNA expression of SREBPs and their downstream genes in cells after treated with
medium and high doses of GAC2. Using SREBPs inhibitor（25-HC）and S6K inhibitor（rapamycin）as control，Western blotting
assay was adopted to determine the expression of SREBP-1 and SREBP-2（in the case of n-SREBPs），relative expression ratio of
phosphorylated S6K to S6K（p-S6K/S6K ratio）. AutoDock 4.0 and other softwares were used for molecular docking of S6K and
GAC2. RESULTS：There was no significant effect of low，
Δ 基金项目：河南省科技攻关项目（No.182102311159）；河南省高
medium and high doses of GAC2 on relative cell viability（P＞
等学校重点科研项目计划（No.17A360017）
＊硕士研究生。研究方向：临床中药学。E-mail：1299763863@ 0.05）. Compared with blank control group，the content of TC
qq.com in lovastatin group and GAC2 high-dose group as well as the
# 通信作者：教授，硕士生导师，博士。研究方向：中药配伍及临 content of TG in lovastatin group， GAC2 medium- and
床应用。电话：0371-65962746。E-mail：whui3697@126.com high-dose groups were decreased significantly（P＜0.05 or P＜

中国药房 2020年第31卷第19期 China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 19 ·2351 ·