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表2 样品含量测定结果（n＝6）                         表 3   了哥王生品及炮制品乙醇提取物对大鼠血清中
        Tab 2 Results of content determination of samples        MDA、SOD、CAT含量的影响（x±±s，n＝6）
              （n＝6）                                        Tab 3 Effects of ethanol extract of W. indica raw and
        待测样品             称样量，g     芫花素含量，mg/g  含量平均值，mg/g         processed products on serum contents of MDA，
        了哥王生品乙醇提取物       0.501 6     0.380 2     0.377 6          SOD and CAT in rats（x±±s，n＝6）
                         0.501 6     0.389 9
                         0.501 6     0.368 8               组别       MDA，nmol/L      SOD，ng/mL     CAT，pg/mL
                         0.501 6     0.376 4               空白组      0.087 5±0.004 8  0.149 5±0.005 2  0.142 6±0.002 2
                                                           生品组      0.084 1±0.005 6  0.156 6±0.005 4 ＊  0.133 0±0.004 6 ＊＊
                         0.501 6     0.374 5                               ＊#             ＊＊#
                         0.501 6     0.375 7               炮制品组     0.080 2±0.004 0  0.158 2±0.001 7  0.143 9±0.007 0
                                                                                  ＊＊
                                                                                                     #
                                                                           ＊
        了哥王炮制品乙醇提取物      0.512 0     0.245 2     0.234 0       注：与空白组比较，P＜0.05， P＜0.01；与生品组比较，P＜0.05
                                                                               ＊
                         0.512 0     0.256 7                   Note：vs. blank group， P＜0.05， ＊ ＊  P＜0.01；vs. raw-product
                                                                #
                         0.514 0     0.218 1               group，P＜0.05
                         0.514 0     0.248 0               行炮制，从而降低其毒性。本课题组在保持民族特色的
                         0.517 0     0.213 4
                         0.517 0     0.222 7               基础上，模仿人体条件，以人工汗液为辅料炮制了哥王，
                                                                                                 [20]
                                                           并优选出具有“减毒增效”的人工“汗渍法” 。与民间
                                     [23]
        并根据了哥王的提取率（10.08％） 以及临床剂量折算
                                                           传统方法相比，该法更加简便、科学且适用于了哥王药
        方法 ，计算得大鼠灌胃剂量约为 317.5 mg/kg（以提取
            [25]
                                                           材大批量、规范化、规模化炮制。
        物质量计，下同）。本课题组前期研究结果表明，在此剂
                                      [23]
        量下了哥王无毒副作用且药效稳定 。                                      了哥王中含有丰富的黄酮类化合物。鉴于芫花素
                                                           既是该药材中的抗氧化有效成分，同时又是毒性成分之
        2.3.3  分组与给药      所有大鼠均适应性饲养 1 周后，随
        机分为3组：了哥王生品乙醇提取物组（生品组）、了哥王                         一，故本研究以此成分为对象，对炮制前后芫花素的含
        炮制品乙醇提取物组（炮制品组）和空白组，每组 6 只。                        量和药材的抗氧化活性进行了比较，拟进一步探讨炮制
        空白组大鼠灌胃等体积1.0％CMC-Na溶液，各给药组大                       前后了哥王药材毒性与药效之间的关系。
        鼠灌胃相应提取物混悬液（317.52 mg/kg），灌胃体积均                        首先，本研究采用 HPLC 法测定了了哥王药材中芫
        为 20 mL/kg，每日 1 次，连续 14 d。在此期间，所有大鼠                花素的含量。在前期研究中，本课题组分别选择甲醇、
        均正常饮食、饮水。                                          乙腈作为流动相，发现以甲醇洗脱时，芫花素峰形较好、
        2.3.4  抗氧化应激指标检测          末次给药后，禁食不禁水              分离度高，因此后续实验选择甲醇作为流动相的有机
        12 h，次日（第15天），大鼠腹腔注射3.0％戊巴比妥钠溶                     相。定量分析结果显示，了哥王生品中芫花素的平均含
        液（0.2 mL/100 g）麻醉后，于腹主动脉取血。血样在室                    量为0.377 6 mg/g；经“汗渍法”炮制后，炮制品中芫花素
        温下静置40 min后，以12 000 r/min离心15 min，分离血              的平均含量降至 0.234 0 mg/g，提示炮制可降低毒性成
        清，于－20 ℃保存。采用酶联免疫吸附测定法（ELISA）                      分的含量。但其是否与“汗渍法”的“减毒增效”作用有
        检测大鼠血清中 MDA、CAT、SOD 的含量，严格按照试                      关，还有待后续研究进一步探讨。
        剂盒说明书操作。采用SPSS 25.0软件对数据进行统计                           作为几乎所有真核生命体中不可或缺的抗氧化酶，
        分析，计量资料均以 x±s 表示，组间比较采用单因素方                        SOD 能清除生物新陈代谢过程中所产生的超氧阴离子
        差分析，P＜0.05表示差异有统计学意义。                              自由基并减少和阻止脂质的过氧化反应，因此其是反映
            结果显示，与空白组比较，生品组大鼠血清中SOD含                       机体抗氧化能力和清除自由基能力的重要实验室指
                                                             [27]
        量显著上升、CAT 含量显著降低（P＜0.05 或 P＜0.01），                 标 。CAT 能清除体内的过氧化氢，还可以氧化甲醛、
        而 MDA 含量虽有所降低，但组间比较差异无统计学意                         苯酚等毒性物质以保护组织和细胞免受氧化损伤，是机
                                                                                       [28]
        义（P＞0.05）；炮制品组大鼠血清 MDA 含量显著降低、                     体氧化防御系统的关键酶之一 。自由基与不饱和脂
        SOD含量显著升高（P＜0.05或P＜0.01），而CAT含量虽                   肪酸发生过氧化反应生成 MDA，后者能与膜蛋白的游
        有所升高，但组间比较差异无统计学意义（P＞0.05）。                        离氨基发生交联，同时可以破坏膜结构和膜蛋白功能，
        与生品组比较，炮制品组大鼠血清中 MDA 含量显著降                         故MDA的含量可以反映机体过氧化的严重程度以及机
        低、SOD含量显著升高（P＜0.05），而CAT含量虽有所升                     体清除自由基的能力          [29-30] 。有鉴于此，本研究通过检测
        高，但组间比较差异无统计学意义（P＞0.05），详见表3。                      大鼠血清中SOD、CAT、MDA含量的变化来初步评价了
        3 讨论                                               哥王生品和炮制品的抗氧化活性。结果显示，了哥王生
            毒性中药炮制是炮制研究领域的重点，也是难点之                         品和炮制品的乙醇提取物均可降低大鼠血清 MDA 含
        一，其目的在于减轻或消除药材的毒副作用、提高其疗                           量，但生品提取物对该指标的影响无统计学意义；两者
        效 。“汗渍法”又称“身背汗湿法”，为苗族地区的一种                         对大鼠血清SOD含量均有显著的提升作用，且炮制品提
          [26]
        特殊炮制法，其具体操作是将药材捆扎于人体腰部，通                           取物对 MDA、SOD 的调节作用强于生品提取物。了哥
        过人体产生的汗液和体温，以汗液浸渍的方式对药材进                           王生品乙醇提取物对大鼠血清 CAT 含量具有显著的下


        中国药房    2020年第31卷第19期                                             China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 19  ·2323 ·
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