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过；滤液蒸干，残渣用甲醇溶解并转移至10 mL量瓶中， 吸取上述系列标准溶液各 20 μL，按“2.2.3”项下的色谱
继续加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶液。分析 条件进样分析，记录峰面积。以待测成分的进样量（x，
前，将供试品溶液用0.45 μm微孔滤膜滤过，取续滤液进 μg）为横坐标、峰面积（y）为纵坐标进行线性回归，得回
样分析。 归方程为 y＝2 280.3x－5.984 6（r＝999 9）。结果表明，
2.2.3 色谱条件与系统适用性试验 色谱柱：Diamon- 芫花素检测进样量的线性范围为0.147 2～7.360 μg。
sil C18 （250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：0.2％磷酸水溶 2.2.5 精密度试验 按“2.2.4”项下方法制备质量浓度
液（A）-甲醇（B）（梯度洗脱：0～5 min，65％B→70％B；5～ 为 2.208 μg/mL 的芫花素标准溶液，按“2.2.3”项下色谱
8 min，70％B→75％B；8～15 min，75％B→78％B；15～ 条件重复进样6次，记录峰面积。结果，芫花素峰面积的
20 min，78％B→80％B）；柱温：30 ℃；流速：1 mL/min； RSD为2.34％（n＝6），表明仪器精密度良好。
检测波长：346 nm；进样量：20 µL。 2.2.6 重复性试验 精密称取了哥王生品乙醇提取物
分别取空白对照溶液（以流动相A、B体积比3 ∶ 7配 0.5 g，共 6 份，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，再按
制）、芫花素对照品溶液、供试品溶液各适量，按上述色 “2.2.3”项下色谱条件进样分析，记录峰面积并按标准曲
谱进样分析，记录色谱图，详见图 1。由图 1 可见，在该 线法计算样品含量。结果，芫花素平均含量为 0.375 9
色谱条件下，芫花素能与其他成分达到较好的分离，分 mg/g（RSD＝1.12％，n＝6），表明本方法重复性良好。
离度大于1.5；理论板数按芫花素峰计不低于3 000。 2.2.7 稳定性试验 取“2.2.2”项下了哥王生品乙醇提
取物供试品溶液，分别于室温下放置 0、2、4、8、12、24、
1 600
1 400 48 h 时按“2.2.3”项下色谱条件进样分析，记录峰面积。
1 200
1 000 结果，芫花素峰面积的 RSD 为 1.61％（n＝7），表明供试
mAU 800
600
400 品溶液室温放置48 h内稳定性良好。
200
0 2.2.8 加样回收率试验 取已知含量的了哥王生品乙
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 醇提取物 0.25 g，共 9 份，精密称定；分别按已有含量的
t，min
A.空白对照溶液 80％、100％、120％加入芫花素对照品溶液各适量，按
1 400 芫花素 “2.2.2”项下方法制备供试品溶液，再按“2.2.3”项下色谱
1 200
1 000 条件进样分析，记录峰面积并计算加样回收率。结果，
mAU 800 平均加样回收率为 98.64％～98.92％，RSD 均小于 1％，
600
400 表明方法准确度良好，详见表1。
200
0 表1 加样回收率试验结果（n＝3）
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 Tab 1 Results of recovery tests（n＝3）
t，min
B.对照品溶液 称样量， 已知量， 加入量， 测得量， 加样回收 平均加样回 RSD，
序号
g mg mg mg 率，％ 收率，％ ％
2 500 1 0.252 5 0.094 9 0.073 6 0.167 9 99.18 98.64 0.55
2 000 2 0.257 0 0.096 6 0.073 6 0.168 8 98.10
mAU 1 500 3 0.253 1 0.095 1 0.073 6 0.167 7 98.64
1 000
4 0.251 2 0.094 4 0.092 0 0.185 5 99.02 98.84 0.84
500
芫花素 5 0.251 0 0.094 4 0.092 0 0.186 0 99.57
0
6 0.253 2 0.095 2 0.092 0 0.185 3 97.93
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18
t，min 7 0.251 5 0.094 5 0.114 0 0.207 5 99.12 98.92 0.22
C.供试品溶液（了哥王生品乙醇提取物） 8 0.250 3 0.094 1 0.114 0 0.206 6 98.68
9 0.251 6 0.094 6 0.114 0 0.207 4 98.95
2 500 2.2.9 样品含量测定 取了哥王生品和炮制品的乙醇
2 000
提取物各适量，平行6份，按“2.2.2”项下方法制备供试品
mAU 1 500 溶液，再按“2.2.3”项下色谱条件进样分析，记录峰面积
1 000
500 并按标准曲线法计算样品含量，结果见表2。
芫花素
0 2.3 “汗渍法”炮制前后了哥王抗氧化能力比较
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18
t，min 2.3.1 药液的配制 分别精密称取了哥王生品和炮制品
D.供试品溶液（了哥王炮制品乙醇提取物）
的乙醇提取物 0.794 g，加 1.0％羧甲基纤维素钠（CMC-
图1 高效液相色谱图 Na）溶液稀释，配制成50 mL的提取物混悬液，备用。
Fig 1 HPLC chromatograms 2.3.2 剂量设置 了哥王日服剂量为生药量 10～15
[24]
[20]
2.2.4 线性关系考察 分别精密量取“2.2.1”项下对照 g ，以其提取物半数致死量（LD50 ） 折算成生药量为
品溶液 0.2、0.5、1、3、5、7、10 mL，置于 10 mL 量瓶中，加 46.678 g（按日用剂量 15.0 g 计算，相当于日用剂量的 3
甲醇稀释至刻度，摇匀，制得系列标准溶液。分别精密 倍）。综合考虑，本研究拟采用2倍日用剂量进行干预，

·2322 · China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 19 中国药房 2020年第31卷第19期