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表2 TSG对T-47D细胞增殖的影响（x±±s，n＝3）
ER-α 421 kDa
Tab 2 Effects of TSG on proliferation of T-47D cell
（x±±s，n＝3） ER-β 501 kDa
增殖率，％
组别
24 h 48 h 72 h
β-actin 530 kDa
空白组 100 100 100
β-E2组 118.99±7.03 ＊＊ 138.95±22.41 132.07±1.20 ＊＊ 空白组 β-E2组 TSG低浓 TSG中浓 TSG高浓
度组
度组
度组
－8
TSG 1×10 mol/L组 112.46±6.01 ＊＊ 145.86±29.29 ＊ 137.24±3.35 ＊＊ 图 2 TSG 对 T-47D 细胞中 ER-α、ER-β mRNA 表达影
－7
TSG 1×10 mol/L组 109.23±4.68 ＊ 148.27±33.71 ＊ 147.26±9.41 ＊＊#
－6
TSG 1×10 mol/L组 115.38±3.43 ＊＊ 147.29±22.99 ＊ 151.13±12.61 ＊＊# 响的电泳图
－5
TSG 1×10 mol/L组 113.35±0.88 ＊＊ 146.01±23.75 ＊ 148.49±8.55 ＊＊# Fig 2 Electrophorograms of the effects of TSG on
－4
TSG 1×10 mol/L组 112.65±2.79 ＊＊ 142.05±6.33 ＊ 136.39±7.18 ＊＊
mRNA expression of ER-α and ER-β in T-47D
#
＊
＊＊
注：与空白组比较，P＜0.05， P＜0.01；与β-E2组比较，P＜0.05
cells
#
＊
Note：vs. blank group， P＜0.05， P＜0.01；vs. β-E2 group，P＜
＊ ＊
0.05 生殖器官发育、维持第二性征，而且在骨代谢、心血管活
动和神经功能中也具有重要作用 。雌激素水平低下
[11]
ER-α 66 kDa
可引发一系列疾病，如骨质疏松、更年期综合征、心血管
疾病等，严重影响了女性的正常生活；同时，长期应用雌
ER-β 55 kDa
激素替代疗法的副作用较多，且可增加雌激素依赖性肿
瘤（如乳腺癌、子宫内膜癌等）发生的风险 。因此，不
[11]
β-actin 45 kDa
良反应少的植物雌激素逐渐受到学者的关注，现已成为
空白组 β-E2组 TSG低浓 TSG中浓 TSG高浓
[12]
度组 度组 度组 相关研究的热点之一 。
图 1 TSG 对 T-47D 细胞中 ER-α、ER-β蛋白表达影响 植物雌激素可与 ER 结合而发挥雌激素样作用，在
的电泳图 调节ER表达水平的同时，亦可用于治疗骨质疏松、围绝
Fig 1 Electrophorograms of the effects of TSG on pro- 经期综合征、心血管疾病、肥胖等症 [12-13] 。ER 主要包括
tein expression of ER-α and ER-β in T-47D cells ER-α和 ER-β，其中 ER-α的亲和力及总体活性更高 。
[14]
TSG是中药制首乌的主要活性成分，前期研究表明其在
表 3 TSG 对 T-47D 细 胞 中 ER-α 、ER-β 蛋 白 及 其
体内具有一定的植物雌激素作用。为进一步探讨该化
mRNA表达量的影响（x±±s，n＝3）
合物雌激素样活性及作用机制，本课题组以 ER（+）
Tab 3 Effects of TSG on protein and mRNA expres-
T47-D 细胞（该细胞含有丰富的 ER，易受雌激素或雌激
sion of ER-α and ER-β in T-47D cells（x ±± s，
素样物质诱导而增殖，是用于检测化合物雌激素样活性
n＝3）
的常用细胞株 ）为对象，以β-E2为阳性对照，通过体外
[15]
蛋白 mRNA
组别 试验初步考察了不同浓度 TSG 对细胞增殖和 ER 表达
ER-α ER-β ER-α ER-β
空白组 0.858±0.062 0.550±0.028 1.680±0.022 0.392±0.014 影响。
β-E2组 1.340±0.102 ＊ 0.710±0.166 ＊ 2.057±0.034 ＊ 0.496±0.017 ＊ CCK-8试验结果显示，各给药组各时间点（除β-E2组
TSG低浓度组 1.378±0.051 ＊ 1.006±0.022 ＊＊# 2.546±0.018 ＊# 0.765±0.035 ＊＊#
TSG中浓度组 1.453±0.090 ＊ 0.705±0.034 ＊ 3.815±0.078 ＊＊## 0.492±0.027 ＊ 48 h外）的细胞增殖率均较空白组显著升高，且用药72 h
－7
－6
TSG高浓度组 1.113±0.017 ＊ 0.739±0.043 ＊ 2.371±0.029 ＊# 0.905±0.026 ＊＊## 时TSG 1×10 、1×10 、1×10 －5 mol/L组的细胞增殖率均
＊＊
注：与空白组比较，P＜0.05， P＜0.01；与β-E2组比较，P＜0.05， 显著高于β-E2组。这提示阳性对照药和 TSG 均具有促
＊
#
P＜0.01 进 T-47D 细胞增殖的作用，且 TSG（1×10 、1×10 、1×
## －7 －6
#
＊
＊ ＊
Note：vs. blank group， P＜0.05， P＜0.01；vs. β-E2 group，P＜ －5
10 mol/L）的作用持续时间可能较阳性对照药更长。
##
0.05，P＜0.01
在本研究过程中发现，TSG各浓度组细胞的增殖率均有
的表达量均显著升高，且 TSG 各浓度组 ER-α mRNA 以 先升高后降低的趋势，且在浓度为 1×10 －6 mol/L（24、72
及 TSG 低、高浓度组 ER-β mRNA 的表达量均显著高于 h）时达到峰值；同时，TSG在1×10 ～1×10 －4 mol/L的浓
－8
β-E2组（P＜0.05或P＜0.01）。其中，β-E2组细胞中ER-α、 度范围内均可显著促进T-47D细胞的增殖，故本研究最
ER-β mRNA 的表达量分别增加了 22％、27％，TSG 低、 终选择了1×10 、1×10 、1×10 －4 mol/L作为TSG后续试
－6
－8
中、高浓度组细胞中上述 mRNA 的表达量分别增加了 验中的低、中、高浓度。
52％、127％、41％（ER-α）和 95％、26％、131％（ER-β）， 本研究进一步采用 Western blotting 法和 RT-PCR 法
详见图2、表3。 分别测定了各组细胞中ER-α蛋白及其mRNA的表达情
4 讨论 况。结果显示，各给药组细胞中 ER-α蛋白及其 mRNA
雌激素是女性体内重要的性激素，不仅能促进女性 的表达量均较空白组显著升高，且 TSG 各浓度组 ER-α
·2318 · China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 19 中国药房 2020年第31卷第19期