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（n＝6），表明该方法准确度较好。加样回收率试验结果 中紫丁香苷含量总体上相对较高，根皮部位次之，叶部
见表2。 位相对较低甚至检测不到；总黄酮含量大小依次为根
表2 加样回收率试验结果 皮＞树皮＞叶，且3个用药部位中总黄酮含量均普遍较
Tab 2 Results of recovery tests 低。同时，在3个不同用药部位中，根皮部位中总黄酮含
称样量， 样品中含 加入量， 测得量， 加样回收 平均加样回 RSD， 量在当年2月最高，且当月根皮部位中紫丁香苷含量仅
测定成分
g 量，μg μg μg 率，％ 收率，％ ％ 次于当年8月，含量也相对较高；树皮部位中紫丁香苷含
0.502 1 0.682 9 0.671 3 1.359 7 100.81
0.501 6 0.682 2 0.671 3 1.372 6 102.80 量在5月达到峰值，且当月树皮部位中总黄酮含量仅次
0.504 9 0.686 7 0.671 3 1.357 2 99.88 于当年10、12月，相对较高；叶部位中紫丁香苷含量和总
紫丁香苷 101.74 1.39
0.503 7 0.685 0 0.671 3 1.382 1 103.77 黄酮含量均在当年 9 月最高。不同采收期大接骨丹根
0.507 6 0.690 3 0.671 3 1.369 5 101.14
0.505 2 0.687 1 0.671 3 1.372 6 102.07 皮、树皮、叶中紫丁香苷和总黄酮含量测定结果见表 3、
2.3 总黄酮含量测定方法的建立 图2。
2.3.1 芦丁对照品溶液的制备 取芦丁对照品适量，精 表3 不同采收期大接骨丹3个部位中紫丁香苷和总黄
密称定，置于 50 mL 量瓶中，加 50％乙醇适量，超声（功 酮含量测定结果（x±±s，n＝3）
率：500 W，频率：40 kHz）2 min溶解后，再加入50％乙醇 Tab 3 Results of content determination of syringin
稀释至刻度，摇匀，得到质量浓度为0.361 0 mg/mL的芦 and total flavonoids in 3 medicinal parts of T.
丁对照品溶液。 angulata during different harvesting periods
2.3.2 供试品溶液的制备 取“2.2.2”项下各供试品溶 （x±±s，n＝3）
液，每份样品精密量取5 mL，置于50 mL量瓶中，按文献 采收日期 紫丁香苷，mg/g 总黄酮，μg/g
根皮
树皮
树皮
根皮
方法 ，分别用5％亚硝酸钠溶液、10％硝酸铝溶液、4％ 2017-01-15 1.36±0.01 6.14±0.23 叶 0.078 4±0.000 3 0.043 8±0.000 4 叶
[11]
氢氧化钠溶液依次进行衍生化后，即得。 2017-02-15 3.56±0.09 6.42±0.39 0.216 8±0.000 2 0.046 1±0.000 3
2017-03-15 3.05±0.03 8.03±0.05 0.101 1±0.000 1 0.041 9±0.000 8
2.3.3 方法学考察 （1）标准曲线的绘制：精密吸取芦
2017-04-15 3.01±0.03 15.52±0.22 0.14±0.01 0.059 0±0.000 3 0.043 5±0.000 6 0.0258±0.000 3
丁对照品溶液0.2、0.4、0.8、1.0、2.0、3.0 mL，分别置于10 2017-05-15 3.05±0.02 26.03±0.12 - 0.063 6±0.000 6 0.051 5±0.000 9 0.0283±0.000 5
mL 量瓶中，用 50％乙醇稀释到刻度，摇匀。按文献方 2017-06-15 1.89±0.02 12.17±0.15 0.11±0.02 0.058 7±0.001 1 0.041 3±0.000 6 0.0312±0.000 3
2017-07-15 3.49±0.04 18.39±0.02 0.11±0.01 0.064 4±0.000 2 0.042 0±0.000 2 0.0330±0.000 2
法 进行预处理，然后在510 nm最大吸收波长下进行测
[11]
2017-08-15 4.87±0.05 10.13±0.04 - 0.088 3±0.000 3 0.044 9±0.000 6 0.0252±0.000 2
定，并以 50％乙醇为空白进行调零，然后以芦丁质量浓 2017-09-15 2.02±0.06 15.96±0.14 0.15±0.02 0.059 0±0.000 1 0.050 8±0.000 5 0.0418±0.000 8
度（c，mg/mL）为横坐标、吸光度（A）为纵坐标进行线性 2017-10-15 1.27±0.02 18.83±0.03 0.11±0.03 0.054 7±0.000 7 0.053 9±0.000 8 0.0280±0.000 3
2017-11-15 1.72±0.02 20.65±0.08 0.11±0.01 0.066 2±0.000 5 0.046 6±0.000 6 0.0323±0.000 3
回归，得到芦丁的回归方程为 A＝11.527 89c+0.049 7 8 2017-12-15 2.08±0.04 18.01±0.01 0.14±0.01 0.048 8±0.001 4 0.061 2±0.000 3 0.0038±0.000 1
（r＝0.999 9），表明芦丁质量浓度在 0.072 2～1.083 0 注：“-”表示未检出
mg/mL范围内线性关系良好。（2）其他方法学考察：按文 Note：“-”means not detected
献方法 依次进行总黄酮含量测定的精密度、稳定性和 3 讨论
[11]
重复性考察。结果，精密度、稳定性（室温22 ℃、2 h）、重 在预试验中，笔者考察了回流提取法、超声提取法、
复性试验的 RSD 依次为 2.85％、2.16％、2.49％（n＝6）， 浸渍法、渗漉法等不同提取方法及甲醇、水、10％乙醇～
平均加样回收率为 99.63％（RSD＝2.19％，n＝6），符合 90％乙醇、无水乙醇等不同提取溶剂对样品中次生代谢
含量测定相关要求。 产物紫丁香苷、总黄酮含量的影响，最终确定以甲醇为
2.4 不同采收期大接骨丹中紫丁香苷和总黄酮含量比 溶剂、采用水浴回流提取的方法进行提取，该方法简便
较分析 易行、提取率高且相对稳定。此外，笔者利用二极管阵
取“2.2.1”项下对照品溶液、“2.2.2”项下各批次样品 列（DAD）检测器检测3个用药部位中紫丁香苷含量时，
的供试品溶液，分别按“2.2.3”项下色谱条件进样分析， 分别考察了在 8 个检测波长（210、220、230、240、250、
记录峰面积，并根据外标法计算出样品中紫丁香苷含 260、270、280 nm）下的测定效果，结果在 210 nm 波长下
量。分别取“2.3.2”项下各批次样品的供试品溶液，用紫 紫丁香苷色谱峰的峰面积相对较大、峰形较好，且分离
外-可见分光光度计在 510 nm 波长处进行检测，根据标 度较高，大接骨丹根皮、树皮、叶样品均能得到较好的检
准曲线计算样品中总黄酮含量。每个样品均重复测定3 测效果。因此，最终确定210 nm作为本研究中紫丁香苷
次。结果显示，在不同采收期内，大接骨丹根皮、树皮、 HPLC法含量测定时的检测波长。
叶部位中紫丁香苷含量分别在8、5、9月最高，总黄酮含 通常，确定药材最佳采收期时，在综合考虑不同采
量分别在2、12、9月最高。在3个用药部位中，树皮部位 收期内各指标性成分含量的同时，还需考虑药材的最高

中国药房 2020年第31卷第17期 China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 17 ·2127 ·