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为纯净水（浙江娃哈哈集团有限公司，批号：20180407）。 紫丁香苷
50
表1 大接骨丹药材采集信息 40
30
Tab 1 Collection information of T. angulata mAU 20
10
0
不同用药部位编号 0 5 10 15 20 25
采集时间 t，min
根皮 树皮 叶
A.对照品溶液
2017-01-15 G1 S1 未采集
2017-02-15 G2 S2 未采集 80
2017-03-15 G3 S3 未采集 mAU 60
40
2017-04-15 G4 S4 Y4 20 紫丁香苷
0
2017-05-15 G5 S5 Y5 0 5 10 15 20 25
2017-06-15 G6 S6 Y6 t，min
2017-07-15 G7 S7 Y7 B.供试品溶液（样品编号：G1）
2017-08-15 G8 S8 Y8 16
2017-09-15 G9 S9 Y9 12
2017-10-15 G10 S10 Y10 mAU 8
4
2017-11-15 G11 S11 Y11 0
2017-12-15 G12 S12 Y12 0 5 10 15 20 25
t，min
2 方法与结果 C.空白对照
2.1 样品预处理 图1 高效液相色谱图
将采集的药材样品于烘箱55 ℃低温烘干，打粉，过 Fig 1 HPLC chromatograms
65目药筛，备用。 刻度，摇匀，按“2.2.3”项下色谱条件进样测定，记录峰面
2.2 紫丁香苷含量测定方法的建立 积。以峰面积为纵坐标（y）、溶液的质量浓度为横坐标
2.2.1 对照品溶液的制备 取紫丁香苷对照品适量，精 （x）进行线性回归，得到紫丁香苷的回归方程为 y＝
密称定，置于50 mL量瓶中，加入甲醇适量，超声（功率： 1.375 3x+0.002 4（r＝0.999 6），表明紫丁香苷质量浓度
500 W，频率：40 kHz）2 min 溶解，再加入甲醇稀释至刻 的线性范围为0.095 9～1.150 8 mg/mL。
度，摇匀，得质量浓度为0.171 2 mg/mL的对照品溶液。 2.2.5 精密度试验 精密吸取“2.2.1”项下对照品溶液，
2.2.2 供试品溶液的制备 分别取G1～G12批次根皮、 按“2.2.3”项下色谱条件下连续进样 6 次，记录峰面积。
S1～S12 批次树皮和 Y4～Y12 批次叶各 1.0 g，精密称 结果，紫丁香苷峰面积的 RSD 为 2.16％（n＝6），表明仪
定，置于圆底烧瓶中，分别加入甲醇100 mL，称定质量， 器精密度良好。
水浴回流提取1 h，放冷，加甲醇补足减失的质量，摇匀， 2.2.6 稳定性试验 取“2.2.2”项下同一个供试品溶液
用0.45 μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。 （样品编号：G1）适量，于室温下放置 0、2、6、10、12、24 h
2.2.3 色谱条件与系统适用性试验 色谱条件参考前 时，分别按“2.2.3”项下色谱条件进样测定，记录峰面
期建立的方法 ，并结合文献方法 [17-20] 进行优化后设 积。结果，紫丁香苷峰面积的 RSD 为 2.34％（n＝6），表
[16]
定。色谱柱为 Agela Promosil C18 （250 mm×4.6 mm，5 明供试品溶液在室温条件下24 h内稳定。
μm）；流动相为 0.5％磷酸溶液（A）-乙腈（B），梯度洗脱 2.2.7 重复性试验 取同一批次药材（样品编号：G1）粉
（0～10 min，91.00％A；10～15 min，91.00％A→88.40％A； 末1.0 g，共6份，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，然
15～20 min，88.40％A→30.00％A；20～25 min，30.00％A； 后按“2.2.3”项下色谱条件进样测定，记录峰面积，并根
25～25.1 min，30.00％ A→91.00％ A；25.1～30 min， 据外标法计算紫丁香苷含量。结果，紫丁香苷含量的
91.00％A）；流速为 1.0 mL/min；检测波长为 210 nm；柱 RSD为2.67％（n＝6），表明该方法重复性较好。
温为 35 ℃；进样量为 5 μL。取“2.2.1”项下对照品溶液 2.2.8 加样回收率试验 取同一批次已知含量的药材
和“2.2.2”项下供试品溶液（样品编号：G1）适量，并以甲 （样品编号：G1）粉末 0.5 g，精密称定，共 6 份，分别置于
醇为空白对照，按此色谱条件进样分析，记录色谱图。 圆底烧瓶中，精密加入 5.0 mL 紫丁香苷对照品溶液[紫
结果显示，待测成分峰与相邻峰间的分离度大于 1.50、 丁香苷质量浓度为 0.134 26 mg/mL（取“2.2.4”项下对照
拖尾因子介于 0.95～1.05 之间，理论板数按紫丁香苷峰 品贮备溶液适量以甲醇稀释制得）]，称定质量；再分别
不低于4 000，且空白对照无干扰，色谱图见图1。 加入95 mL甲醇，水浴回流提取1 h，放冷，加甲醇补足减
2.2.4 线性关系考察 取紫丁香苷对照品适量，按 失的质量，摇匀，用0.45 μm微孔滤膜滤过，取续滤液，按
“2.2.1”项下方法制备质量浓度为1.918 0 mg/mL的对照 “2.2.3”项下色谱条件进样测定，记录峰面积，根据外标
品贮备液。精密量取该贮备液0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、 法计算紫丁香苷含量，并计算其加样回收率。结果，紫
6.0 mL，分别置于不同10 mL棕色量瓶中，用甲醇稀释至 丁香苷的平均加样回收率为 101.74％，RSD 为 1.39％

·2126 · China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 17 中国药房 2020年第31卷第17期