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理学基础 ，其中浙贝母化痰、止咳的活性成分已较为明                                         表1 浙贝母药材信息
                [2]
        确，但对其抗炎活性成分的研究相对较少，主要集中在                                 Tab 1 Sample information of F. thunbergii
        生物碱类成分贝母素甲和贝母素乙               [3-5] 。               编号              产地                     加工工艺
            质量标志物是2016年提出的中药质量评价新概念，                        S1              贵州黔西南                  去皮
                                                            S2              浙江章水                   无硫熏
        即通过一系列筛选和验证研究，确定与该药物目标活性
                                                            S3              浙江龙观                   无硫熏
        相关的成分，作为反映其安全性和有效性的标志性物质                            S4              浙江舟山                   无硫熏
        进行质量控制       [6-7] 。中药谱-效研究是筛选中药质量标志                S5              浙江磐安                   硫熏
                                                            S6              湖南安化                   硫熏
        物的重要方法和技术之一，即先将化学指纹图谱中有用
                                                            S7              贵州兴义                   未去皮
        的化学信息提取出来，然后与药效实验结果相结合，通                            S8              浙江金华                   无硫熏
        过线性或非线性数学处理，建立谱-效数学模型，从而确                           S9              江苏南通                   无硫熏
                                                            S10             贵州兴义                   无硫熏
        定与药效相关的化合物 。本研究采用超高效液相色
                              [8]
        谱-四极杆-飞行时间串联质谱法（UPLC-Q-TOF-MS/                      Plus C18 （150 mm×3 mm，1.8 μm）；流动相为乙腈（A）-
        MS）建立10批不同产地浙贝母的指纹图谱；以小鼠耳肿                          0.1％甲酸水溶液（B），梯度洗脱（0～5 min，2％A→25％A；
        胀度和血清中丙二醛（MDA）、一氧化氮（NO）水平为药                         5～10 min，25％A→45％A；10～15 min，45％A→80％A；
        效指标，采用双变量相关分析法和灰色关联度分析法对                            15～25 min，80％A→100％A；25～30 min，100％A；30～
        UPLC-Q-TOF-MS/MS 指纹图谱中各共有峰与抗炎药效                     33 min，100％A→2％A）；流速为 0.4 mL/min；柱温为
        指标的相关性进行分析，从而筛选出质量标志物并进行                            30 ℃；进样量为2 µL。
        鉴定，以期初步揭示浙贝母具有抗炎作用的药效物质基                                质谱条件：电喷雾离子源，V模式，电压为3.0 kV，离
        础，为其质量控制和资源开发提供参考。                                  子源温度为 100 ℃，去溶剂气温度为 400 ℃；正、负离子
        1 材料                                                扫描模式，扫描范围为质荷比（m/z）50～1 200；去溶剂气
        1.1  仪器                                             流速为800 L/h。
            Acquity 型 UPLC 色谱仪、PGA495 型 MS 仪（美国             2.2  供试品溶液的制备
        Waters 公司）；125D-1CN 型十万分之一电子分析天平                        取浙贝母药材适量，粉碎，过四号筛（下同），取其粉
        （德国Sartorius公司）；VS10-300C型超声波清洗器（无锡                 末 2 g，加入浓氨水溶液 4 mL，浸润 1 h，加入三氯甲烷-
        沃信仪器制造有限公司）；HH-W420型电热恒温水浴锅                         甲醇（4 ∶ 1，V/V）40 mL，混匀，称定质量，于 80 ℃水浴加
        （济南欧莱博科学仪器有限公司）；UV-5200PC型紫外可                       热回流 2 h，放冷，补足减失的质量，过滤；取续滤液 10
        见 分 光 光 度 计（上 海 力 申 科 学 仪 器 有 限 公 司）；               mL，于 98～100 ℃水浴条件下蒸干，残渣以甲醇溶解并
        HBS-1096A 型酶标仪（南京德铁实验设备有限公司）；                       定容于2 mL 量瓶中，即得供试品溶液。
               TM
        Frontier 5000型微量高速离心机（美国Ohaus公司）。                   2.3  方法学考察
        1.2  药品与试剂                                              本研究在正、负离子扫描模式下均进行方法学
            西贝素、贝母辛、贝母素甲、贝母素乙对照品（上海                         考察。
        源 叶 生 物 科 技 有 限 公 司 ，批 号 ：B21331、B20082、            2.3.1  精密度试验      取浙贝母药材（编号：S1）粉末2 g，
        B20080、B20081，纯度均大于 99.0％）；MDA、NO 酶联                按“2.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱与
        免疫吸附试验（ELISA）检测试剂盒（南京建成生物工程                         质谱条件连续进样5次。在正、负离子扫描模式下，分别
        研究所，批号：20190203、20190119）；地塞米松片（遂成                  以 6 号峰（贝母素甲）、5 号峰（浙贝素）的保留时间和峰
        药业股份有限公司，批号：180803，规格：0.75 mg）；甲醇、                  面积为参照，记录各共有峰的相对保留时间和相对峰面
        乙腈为色谱纯，甲酸为质谱级，水为纯净水。浙贝母药                            积。结果，在正离子扫描模式下，26 个共有峰相对保留
        材购于浙江磐安药材市场，经浙江医药高等专科学校中                            时间和相对峰面积的RSD均小于2.40％（n＝5）；在负离
        药学院杨雄志教授鉴定为百合科植物浙贝母（F. thun-                        子扫描模式下，10个共有峰相对保留时间和相对峰面积
        bergii Miq.）的干燥鳞茎，药材信息详见表1。                         的 RSD 均小于 2.80％（n＝5），详见表 2、表 3。这表明本
        1.3 动物                                              方法精密度良好。
            洁净级ICR小鼠，雌雄各半，体质量（20±2）g，购于                     2.3.2  重复性试验      取浙贝母药材（编号：S1）粉末2 g，
        长春市亿斯实验动物技术有限责任公司，动物生产许可                            共 5 份，按“2.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项下
        证号：SCXK（吉）2018-0007。                                色谱与质谱条件进样分析。在正、负离子扫描模式下，
        2 方法与结果                                             分别以 6 号峰（贝母素甲）、5 号峰（浙贝素）的保留时间
        2.1  色谱与质谱条件                                        和峰面积为参照，记录各共有峰的相对保留时间和相对
             色谱条件：色谱柱为 Agilent Zorbax HPLC Eclipse          峰面积。结果，在正离子扫描模式下，26 个共有峰相对


        ·2130 ·  China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 17                                 中国药房    2020年第31卷第17期
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