Page 67 - 2020年17期

液 1 和“2.1.1”项下供试品溶液、缺人工牛黄阴性对照溶 稳定。
液适量，按“2.2.1”项下色谱条件进样测定，记录色谱 2.2.8 重复性试验 取复方小儿退热栓样品（批号：
图。结果，胆酸、猪去氧胆酸与相邻色谱峰分离良好，理 20190301）共 6 份，每份约 3.0 g，按“2.1.1”项下“精密称
论板数按胆酸峰计不低于 5 000，且缺人工牛黄阴性样 定，……，取续滤液”方法制备供试品溶液，再按“2.2.1”
品无干扰，表明本方法专属性良好，详见图3。 项下色谱条件进样测定，以外标对数法计算胆酸、猪去
700 700 氧胆酸含量。结果，胆酸、猪去氧胆酸平均含量分别为
600 600
mV 500 猪去氧胆酸 mV 500 胆酸 猪去氧胆酸 0.29、0.36 mg/g，RSD分别为2.49％、2.99％（n＝6），表明
400
400
U， 300 胆酸 U， 300
200
200
100 100 方法重复性良好。
0 0
0 4 8 12 16 20 24 0 4 8 12 16 20 24 2.2.9 加样回收率试验 精密称取已知胆酸、猪去氧胆
t，min t，min
A.混合对照品溶液1 B.供试品溶液 酸含量的样品（批号：20190301）共6份，每份约1.5 g，精
700 密加入25 mL“2.2.2”项下混合对照品溶液2和75 mL甲
600
mV 500 醇，按“2.1.1”项下“称定质量，……，取续滤液”方法制备
400
U， 300
200
100 供试品溶液，再按“2.2.1”项下色谱条件进样测定，并计
0
0 4 8 12 16 20 24 算加样回收率，结果见表1。
t，min
C.缺人工牛黄阴性对照溶液 表1 胆酸、猪去氧胆酸加样回收率试验结果（n＝6）
Tab 1 Results of recovery tests of choleic acid and
图3 胆酸、猪去氧胆酸HPLC色谱图
Fig 3 HPLC chromatograms of choleic acid and hyo- hyodeoxycholic acid（n＝6）
deoxycholic acid 成分 取样量， 样品含量， 加入量， 测得量， 加样回收率， 平均加样回 RSD，
g mg mg mg ％ 收率，％ ％
2.2.4 线性关系考察 称取胆酸对照品 30.113 mg、猪 胆酸 1.501 3 0.435 4 0.446 0 0.866 1 96.57 100.49 1.91
1.503 2 0.435 9 0.446 0 0.887 8 101.32
去氧胆酸对照品 42.462 mg，置于 50 mL 量瓶中，加甲醇
1.544 7 0.448 0 0.446 0 0.895 3 100.30
溶解并稀释至刻度，制成每1 mL分别含胆酸0.60 mg、猪 1.521 9 0.441 4 0.446 0 0.894 7 101.65
去氧胆酸0.85 mg的混合对照品母液。分别精密吸取该 1.526 5 0.442 7 0.446 0 0.895 7 101.57
1.505 8 0.436 7 0.446 0 0.885 7 100.68
母液 0.5、1、2、5、8、10、15 mL，置于 20 mL 量瓶中，加甲
猪去氧胆酸 1.501 3 0.540 5 0.527 5 1.063 9 99.23 100.35 1.92
醇稀释至刻度，摇匀，即得系列混合对照品溶液。分别 1.503 2 0.541 2 0.527 5 1.074 3 101.07
精密吸取上述系列混合对照品溶液各 10 μL，按“2.2.1” 1.544 7 0.556 1 0.527 5 1.090 4 101.29
1.521 9 0.547 9 0.527 5 1.091 6 103.07
项下色谱条件进样测定，记录峰面积。分别以胆酸、猪
1.526 5 0.549 5 0.527 5 1.092 0 102.84
去氧胆酸峰面积对数值（y）为纵坐标、进样量对数值（x， 1.505 8 0.542 1 0.527 5 1.074 1 100.86
μg）为横坐标，绘制回归曲线。结果，胆酸的回归方程为 2.2.10 样品含量测定 分别取17批复方小儿退热栓样
y＝1.696x+3.091 0（r＝0.999 9），猪去氧胆酸的回归方程 品适量，按“2.1.1”项下“精密称定，……，取续滤液”方法
为 y＝1.679 2x+3.053 2（r＝0.999 3），表明胆酸、猪去氧 制备供试品溶液，再按“2.2.1”项下色谱条件进样测定，
胆酸进样量分别在 0.150 0～4.500 0、0.212 5～6.375 0 按外标对数法计算胆酸、猪去氧胆酸含量，平行 2 份操
μg范围内线性关系良好 作，取平均值，结果见表2。
2.2.5 检测限与定量限考察 取“2.2.2”项下混合对照 2.3 对乙酰氨基酚的含量测定
品溶液1适量，用甲醇逐级稀释，按“2.2.1”项下色谱条件 采用HPLC-紫外法进行测定。
进样测定，分别以信噪比 3 ∶ 1、10 ∶ 1 计算检测限和定量 2.3.1 色谱条件 色谱柱为 Agilent ZORBAX SB-C18
限。结果，胆酸、猪去氧胆酸的检测限分别为36、42 ng， （250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相为甲醇-水（20 ∶ 80，
定量限分别为72、84 ng。 V/V）；流速为 1.0 mL/min；柱温为 30 ℃；检测波长为 244
2.2.6 精密度试验 精密吸取“2.2.2”项下混合对照品 nm；进样量为10 μL。
溶液1适量，按“2.2.1”项下色谱条件连续进样测定6次， 2.3.2 溶液的制备 称取对乙酰氨基酚对照品 3.605
记录峰面积。结果，胆酸、猪去氧胆酸峰面积的 RSD分 mg，置于50 mL量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，制
别为0.84％、0.69％（n＝6），表明仪器精密度良好。 成每1 mL含72.03 μg对乙酰氨基酚的溶液，即得乙酰氨
2.2.7 稳定性试验 取“2.1.1”项下同一供试品溶液（批 基酚对照品溶液。取复方小儿退热栓样品适量，按
号：20190301），于室温下放置0、2、4、6、8、12、24 h 后，按 “2.1.1”项下“研匀，取适量……于 0～4 ℃放置 1.5 h 后，
“2.2.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积。结果，胆 以 3 000 r/min 离心 5 min，取上清液放至室温”方法处
酸、猪去氧胆酸峰面积的 RSD 分别为 2.59％、0.27％ 理。然后取该上清液 5 mL，置于 25 mL 量瓶中，用甲醇
（n＝6），表明供试品溶液在室温下放置 24 h 内基本 稀释至刻度，摇匀；再精密量取该稀释溶液 2 mL，置于

中国药房 2020年第31卷第17期 China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 17 ·2109 ·