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量，摇匀，以0.45 µm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。 表2 7种三萜类成分的回归方程与线性范围
2.3 方法学考察 Tab 2 Regression equation and linear range of 7
2.3.1 系统适用性试验 取阴性对照溶液（即甲醇溶 kinds of triterpenoids
液）、混合对照品溶液、供试品溶液（样品编号：S26），分 待测成分 回归方程 r 线性范围，μg
别按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录色谱图。结果显 去氢土莫酸 y＝6.567 4x+1.030 5 0.999 3 0.40～2.01
猪苓酸C y＝6.896 5x+0.691 7 0.999 2 0.40～2.03
示，7 种待测成分与各自相邻峰间的分离度均大于 1.5，
3-表去氢土莫酸 y＝5.474 5x+0.330 8 0.999 3 0.29～1.48
理论板数均大于 10 000，色谱峰对称因子在 0.95～1.05 3-O-乙酰基-16α-羟基-氢化松苓酸 y＝12.54 9x+0.424 5 0.999 3 0.14～0.72
之间，且阴性对照无干扰，结果见图1。 去氢茯苓酸 y＝3.328 8x+0.224 4 0.999 0 0.20～1.02
茯苓酸 y＝9.310 1x+3.040 8 0.999 2 1.20～6.34
80
松苓新酸 y＝8.421 7x+0.368 4 0.999 1 0.19～0.97
60 6
mAU 40 1 4 2.3.4 精密度试验 取供试品溶液（样品编号：S26）适
20 2 3 5
7 量，按“2.1”项下色谱条件进样测定，连续测定6次，记录
0
0 4 8 12 16 20 24 28 32 36 40 44 48 52 56 峰面积。结果显示，去氢土莫酸、猪苓酸 C、3-表去氢土
t，min
A.混合对照品溶液 莫酸、3-O-乙酰基-16α-羟基-氢化松苓酸、去氢茯苓酸、
220 茯苓酸、松苓新酸峰面积的 RSD 分别为 1.60％、1.72％、
180
mAU 140 0.42％、1.70％、1.64％、1.61％、1.52％（n＝6），表明仪器
100
60 1 4 6 精密度良好。
20 2 3 5 7
2.3.5 重复性试验 称取茯苓细粉（样品编号：S26）2 g，
0 4 8 12 16 20 24 28 32 36 40 44 48 52 56
t，min 平行 6 份，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，再按
B.供试品溶液
“2.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积，并以外标法
80
60 计算各成分的含量。结果显示，去氢土莫酸、猪苓酸C、
mAU 40 3-表去氢土莫酸、3-O-乙酰基-16α-羟基-氢化松苓酸、去
20
0 氢茯苓酸、茯苓酸、松苓新酸含量的RSD分别为0.72％、
0 4 8 12 16 20 24 28 32 36 40 44 48 52 56
t，min 0.72％、1.29％、1.31％、0.97％、0.64％、0.56％（n＝6），表
C.阴性对照溶液
明本方法重复性良好。
注：1.去氢土莫酸；2.猪苓酸 C；3. 3-表去氢土莫酸；4. 3-O-乙酰 2.3.6 稳定性试验 取同一供试品溶液（样品编号：
基-16α-羟基-氢化松苓酸；5.去氢茯苓酸；6.茯苓酸；7.松苓新酸
S26），分别于室温下放置0、2、4、8、12、24 h时，按“2.1”项
Note：1. dehydrotomorphic acid；2. polyporhinic acid C；3. 3-epide-
下色谱条件进样测定，记录峰面积。结果显示，去氢土
hydrotomorphic acid；4. 3-O-acetyl-16 α-hydroxy-hydrogenolysaccharic
acid；5. dehydrotomorphic acid；6. pachymic acid；7. dehydrotrameteno- 莫酸、猪苓酸C、3-表去氢土莫酸、3-O-乙酰基-16α-羟基-
lic acid 氢化松苓酸、去氢茯苓酸、茯苓酸、松苓新酸峰面积的
图1 高效液相色谱图 RSD分别为1.81％、1.97％、1.93％、1.35％、2.03％、0.64％、
Fig 1 HPLC chromatograms 0.62％（n＝6），表明供试品溶液在室温下放置 24 h 内
2.3.2 线性关系考察 精密吸取混合对照品溶液 10、 稳定。
18、20、25、30、50 μL，分别按“2.1”项下色谱条件进行测 2.3.7 加样回收率试验 精密称取已知含量的茯苓细
定，记录峰面积。以峰面积为纵坐标（y）、进样量为横坐 粉（样品编号：S26）1 g，平行6份，按与已知成分含量1∶1
标（x，µg）进行线性回归。结果表明，各成分在各自进样 （m/m）的比例精密加入相应对照品，按“2.2.2”项下方法
量范围内与其峰面积均呈良好的线性关系（r 均不低于 制备供试品溶液，再按“2.1”项下色谱条件进样测定，记
0.999 0）。7 种三萜酸类成分的回归方程与线性范围测 录峰面积，以外标法计算各成分的含量并计算加样回收
定结果见表2。 率。结果显示，茯苓中7种待测成分的平均加样回收率
2.3.3 定量限与检测限考察 分别精密量取“2.2.1”项 为 96.74％～104.04％，RSD 为 0.54％～1.55％（n＝6），
下混合对照品溶液适量，以甲醇倍比稀释后，按“2.1”项 表明本方法准确度较好。加样回收率试验结果见表 3。
下色谱条件进样测定，以信噪比 10 ∶ 1、3 ∶ 1 分别计算定 2.3.8 耐用性考察 在固定其他色谱条件不变的情况
量限、检测限。结果，去氢土莫酸、猪苓酸C、3-表去氢土 下，分别考察不同型号色谱柱[Thermo Acclaim 120 C18
莫酸、3-O-乙酰基-16α-羟基-氢化松苓酸、去氢茯苓酸、 （250 mm ×4.6 mm，5 μm）、Sepax GP-C18 （250 mm ×4.6
茯苓酸、松苓新酸的定量限分别为 0.282 8、0.284 2、 mm，5 μm）、Agela Innoval C18 （250 mm ×4.6 mm，5 μm）]
0.237 6、0.102 2、0.142 8、0.152 2、0.116 4 μg，检测限分别 和不同柱温（30、35 ℃）对7种成分含量测定的影响。试
为 0.080 8、0.081 2、0.089 1、0.029 2、0.040 8、0.050 7、 验重复2次，取平均值。结果显示，在不同色谱柱或不同
0.038 8 μg。 温度下测得的 7 种成分含量无明显差异，RSD 均小于

中国药房 2020年第31卷第17期 China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 17 ·2103 ·