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flata Bat.）或光果甘草（G. glabra L.）的干燥根和根茎中              WY-103D型恒温振荡器（上海智城分析仪器制造有限公
        提取的甘草酸经水解后精制得到的五环三萜类化合                              司）；RHD S025 型磁力搅拌仪（德国 IKA 公司）；HERA-
        物 。药理研究证实，GA及其衍生物可通过诱导肿瘤细                           cell VIOS 160i型细胞培养箱（美国Thermo Fisher Scien-
          [1]
        胞的凋亡和分化、阻滞细胞周期、抑制肿瘤细胞多药耐                            tific 公司）；Synergy Mx 型多功能微孔板检测仪（美国
                                                      [2]
        药以及抑制促癌剂的诱癌作用等途径来发挥对肝癌 、                            BioTek公司）。
              [3]
                               [5]
                                              [7]
        皮肤癌 、结肠癌 、乳腺癌 、卵巢癌 、胃癌 及白血病                    [8]  1.2 药品与试剂
                                       [6]
                       [4]
        等多种肿瘤细胞系体外生长的抑制作用，且对正常体细                                GA 原料药[南京泽朗医药科技有限公司，批号：
                     [9]
        胞的毒性较小 ；研究还发现，GA 具有抗病毒、抗菌、抗                         20180729，纯度（HPLC 法检测）：≥98.5％]；GA 对照品
        溃疡、保肝护肝、降血糖、降血脂、抗氧化和改善内分泌                          （中国食品药品检定研究院，批号：110723-201413，纯
                           [10]
        异常等多种生物活性 。此外，GA 在工业中也有广泛                           度：99.6％）；PVP K30（西安天正药用辅料有限公司）；
        应用，可用于合成天然防腐剂、天然增色剂、天然增稠剂                           MTT 检测试剂盒（江苏凯基生物技术股份有限公司，批
                       [11]
        和防晒养护品等 。但由于该化合物的水溶性较差，                             号：KGA311）；二甲基亚砜（DMSO）（细胞培养级，美国
        导致其在临床药物研发等领域的应用受到了一定的                              Thermo Fisher Scientific 公司）；胎牛血清（FBS）、0.25％
        限制。                                                 胰蛋白酶、青链霉素双抗混合液（100×）、MEMα培养基
            纳米制剂是近年来的药剂学研究热点之一，可有助                          均购自美国Gibco公司；甲醇和乙腈均为色谱纯，其余试
        于增强药物缓控释性能、靶向定位作用及生物利用度，                            剂均为分析纯，水为纯净水。
        并提高患者的服药依从性            [12-13] 。纳米粒是指粒径大小为          1.3 细胞
        10～1 000 nm的固体胶体颗粒，可由脂类或高分子聚合                           人肝癌细胞 HepG2 购自中国科学院上海生科院细
        物制备而成，具有制备过程简单、物理稳定性高、药物释                           胞资源中心。
        放稳定等特点 。与脂质体相比，纳米粒所用赋形剂较                            2 方法与结果
                     [14]
        少；与传统剂型相比，纳米粒生物相容性好、溶解度高，                           2.1  GA纳米粒的制备
                                      [14]
        具有可缓控释及靶向传递等优点 ；此外，纳米粒还具                                采用反溶剂沉淀-冷冻干燥法制备纳米粒。称取
        有小尺寸效应和表面效应，可将药物包裹于其中，避免                            PVP K30 40 mg，加水 20 mL 使溶解，制成稳定剂；称取
        被机体降解或消除，是促进药物分布和吸收的优良载                             GA 原料药 50 mg，溶于甲醇 5 mL 中，得 GA-甲醇溶液，
          [15]
        体 。由此可见，将难溶性药物制成纳米粒可解决其溶                            备用。于室温条件下，将上述稳定剂20 mL置于磁力搅
        解度和溶出度问题，有助于改善药物在体内的分布、提                            拌仪中，以 3 000 r/min 搅拌，随后将 GA-甲醇溶液缓慢
        高其口服生物利用度。                                          注入其中，继续搅拌10 min，得GA纳米混悬液。将上述
            纳米粒的常用制备方法包括反溶剂沉淀法、高压均                          混悬液滤过并减压浓缩至原体积的1/3，经冷冻干燥后，
        质法、介质研磨法等，其中以反溶剂沉淀法较为常用 。                           即得GA纳米粒78 mg。
                                                     [16]
        聚乙烯吡咯烷酮（PVP，如 PVP K30）是一种高分子聚合                      2.2  GA纳米粒的表征
        物，呈无定型态，既溶于水又溶于多种有机溶剂，增溶作                           2.2.1 X 射线衍射分析          分别称取 GA 原料药、PVP
        用优、络合作用强、分散效果好，且廉价易得，同时兼具                           K30、“2.1”项下所制GA纳米粒各50 mg，研磨，过200目
        优异的溶解性和良好的生物相容性，是一种理想的载体                            筛。取上述粉末各适量，置于样品架中，采用 X 射线粉
        材料 。本研究以PVP K30为载体，采用反溶剂沉淀-冷                        末衍射仪检测。检测条件：Cu-K辐射，石墨单色器，θ/2θ
            [17]
        冻干燥法制备GA纳米粒，借助X射线衍射法、红外光谱                           连续扫描，电压40 kV，电流150 mA，扫描速度8°/min，步
        法、差示扫描量热法对其进行表征，采用高效液相色谱                            长 0.02°，扫描范围 3°～40°。结果，GA 原料药在 5.6°、
        法（HPLC）测定纳米粒中 GA 的含量，并采用 MTT 法测                     6.8°、9.8°、13.8°、14.6°、15.1°、17.5°、19.8°处均有较强衍
        定 GA 纳米粒的抗肿瘤活性，以期为 GA 的应用及其相                        射峰，表明其以晶体形式存在（见图 1A）；PVP K30 仅在
        关制剂的开发提供参考。                                         11.7°、20.4°处各有 1 个弥散衍射峰，表明 PVP K30 以无
        1 材料                                                定型态存在（见图1B）；在GA纳米粒的衍射图谱中，GA
        1.1 仪器                                              的特征峰消失，仅在 19.7°处出现 1 个弥散衍射峰，提示
            Zetasizer Nano S90 型纳米粒度分析仪（英国 Mal-             GA可能与PVP K30形成了新的物相（见图1C）。
        vern 公司）；D/max-2550 型 X 射线粉末衍射仪（日本                  2.2.2  红外光谱分析       分别称取GA原料药、PVP K30、
        Rigaku 公司）；DSC-1 型差示扫描量热仪（瑞士 Mettler               “2.1”项下所制GA纳米粒各5 mg，使用傅里叶红外光谱
                                                                                                         －1
        Toledo 公司）、Spectrum 400 型傅里叶红外光谱仪（英国                仪进行检测。检测条件：光谱扫描范围4 000～650 cm ，
        PerkinElmer 公司）；1200 型 HPLC 仪（美国 Angilent 公         分辨率 4 cm ，扫描次数 16 次。结果，GA 原料药在
                                                                       － 1
                                                                                    －1
                                                                                                       －1
        司）；FDU-1100 真空冷冻干燥机（日本 Eyela 公司）；ZH-                3 434 cm （羟基）、2 945 cm （亚甲基）、1 701 cm （羧
                                                                    －1
        ·1590  ·  China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 13                                中国药房    2020年第31卷第13期
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