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量，并计算载药量：载药量（％）＝m 游离/m 总×100％（式中， 120
[16]
m 游离、m 总分别为游离 GA 和 GA 纳米粒的质量） 。结 100
％
果，3 份 GA 纳米粒的载药量分别为 16.01％、15.92％、 80 GA原料药
16.03％，平均载药量为15.99％（RSD＝0.06％，n＝3）。 cell survival rate， 60
2.6 GA纳米粒的体外抗肿瘤活性研究 40
采用MTT法测定。将HepG2细胞接种于MEMα完 20
GA纳米粒
全培养基（即含 10％FBS、1％青链霉素双抗混合液的 0
1 1.25 1.5 1.75 2 2.25 2.5
MEMα培养基，下同）中复苏后，稳定传代 2 次。取传代 lgc
后处于对数生长期的细胞，按1.0×10 个/mL以100 μL/孔 图 6 GA 原料药及纳米粒对 HepG2 细胞的抑制曲线
5
接种至 96 孔板中，置于 5％ CO2、37 ℃细胞培养箱中培 （n＝3）
养24 h后，替换培养基为含0.5％FBS的MEMα培养基， Fig 6 Inhibitory curves of GA and its nanoparticles
孵育过夜，将细胞随机分为空白对照组（DMSO）和给药 on HepG2 cells（n＝3）
组（GA原料药及纳米粒的终浓度分别均为12.5、25、50、
3 讨论
100、200 μmol/L，以GA计；剂量设置参考本课题组前期
纳米技术的发展为药物输送系统的研究提供了新
预试验结果和含量测定结果），每组设3个复孔。吸弃上
的思路和方向。目前，肿瘤的临床治疗以手术治疗为
清液，空白对照组加入含 0.1％DMSO 的 MEMα完全培
主，并辅以化疗、放疗和生物治疗，而固体脂质纳米粒是
养基100 μL，各给药组加入含相应药物的MEMα完全培
肿瘤治疗中最有应用前景的纳米载体，除可改善化疗药
养基 100μL，置于 5％ CO2、37 ℃细胞培养箱中培养 24
物溶解度和生物利用度外，还可克服其靶向性不佳的缺
h；向各孔中加入MTT试剂50 μL，于37 ℃孵育4 h；吸弃
[18]
点 。
上清液，向各孔中加入DMSO 150 μL，于37 ℃恒温振荡
GA 生物活性多样且应用广泛，但由于该化合物较
器中以 500 r/min 振摇 5 min 后，采用多功能微孔板检测
低的溶解度使得其应用受到了一定的限制 [2-11] 。为改善
仪于490 nm波长处检测各孔的光密度（OD）值。上述试
GA 的溶解度和生物利用度，并将其制成适宜的制剂类
验重复3次。以空白对照组为100％，计算细胞存活率：
型，国内外学者进行了多方面的尝试和研究 [19-20] ，常见的
细胞存活率（％）＝（各药物组平均OD值/空白对照组平
剂型包括微晶纤维素微丸 、聚乳酸-羟基乙酸共聚物
[21]
均OD值）×100％，并计算半数抑制浓度（IC50 ）。
[22]
（PLGA）微球 、脂质凝胶 、脂质混悬剂 、长循环固体
[23]
[24]
采用 GraphPad Prism 5 软件对数据进行统计分析。 [25]
脂质纳米粒 等。考虑到纳米粒制备过程简单、物理稳
计量资料均以x±s表示，组间比较采用t检验。P＜0.05
定性高、药物释放稳定、所用赋形剂少、不易被机体降解
为差异有统计学意义。结果显示，与空白对照组比较，
或消除等优点 [14-15] ，本研究拟将GA制成纳米粒。PVP作
GA 原料药 200 μmol/L 组和 GA 纳米粒各剂量组的细胞 为一种合成水溶性高分子化合物，具有优良的生理惰
存活率均显著降低，且 GA 纳米粒组（除 12.5 μmol/L 组
性，不参与人体新陈代谢，同时具有优良的生物相容性，
外）显著低于同剂量GA原料药组（P＜0.01）；GA原料药 是一种理想的纳米粒稳定剂 。因此，本研究选择常用
[26]
及纳米粒的 IC50值分别为 364.4、86.3 μmol/L，前者是后 的PVP K30为载体材料。
者的 4.2 倍。GA 原料药及纳米粒对 HepG2 细胞的抑制 与介质研磨法和高压均质法等耗能过程相比，反溶
作用见表2，两者的抑制曲线见图6。 剂沉淀法具有低耗能、操作简单等优点，同时还具有溶
表2 GA原料药及纳米粒对HepG2细胞的抑制作用 剂选择范围较广、温度适用范围大的优势，是一种常用
Tab 2 Inhibitory effect of GA and its nanoparticles 的药物纳米粒制备方法 。与传统的反溶剂沉淀法相
[27]
on HepG2 cells 比，本研究还增加了冷冻干燥的处理步骤，以保证制备
组别 细胞存活率，％ 组别 细胞存活率，％ 的纳米粒粒径小、分布均匀 。在制备 GA 纳米粒的基
[28]
空白对照组 100 GA纳米粒12.5 μmol/L组 94.35±1.15 ＊＊ 础上，本研究采用X射线衍射法、红外光谱法、差示扫描
GA原料药12.5 μmol/L组 95.48±8.50 GA纳米粒25 μmol/L组 73.38±1.19 ＊＊##
GA原料药25 μmol/L组 97.31±1.03 GA纳米粒50 μmol/L组 88.53±0.18 ＊＊## 量热法、粒度分析等方法对所得纳米粒进行表征；采用
GA原料药50 μmol/L组 100.89±1.34 GA纳米粒100 μmol/L组 40.36±0.89 ＊＊## HPLC 法测定了 GA 原料药与纳米粒的溶解度，并同法
GA原料药100 μmol/L组 94.86±3.79 GA纳米粒200 μmol/L组 9.91±0.88 ＊＊## 测定了纳米粒中 GA 的载药量；同时，采用 MTT 法比较
GA原料药200 μmol/L组 80.01±2.62 ＊＊
了 GA 原料药与纳米粒对人肝癌细胞 HepG2 细胞增殖
注：与空白对照组比较， P＜0.01；与 GA 原料药组比较，P＜
##
＊＊
的影响。
0.01
Note：vs. blank control group， ＊ ＊ P＜0.01；vs. GC raw material 结果显示，本研究所制 GA 纳米粒中 GA 的 X 射线
group，P＜0.01 衍射特征峰和红外特征吸收峰均消失，吸热峰发生改
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中国药房 2020年第31卷第13期 China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 13 ·1593 ·