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MAPK 蛋白表达的荧光密度显著升高（P＜0.01），表明                      表 3   各组大鼠脊髓背角内 Iba-1、p-p38 MAPK、IL-6、
        小胶质细胞被激活；与模型组比较，8-OaS组大鼠脊髓背                              IL-1β及 TNF-α蛋白表达水平的测定结果（x±±s，
        角内 Iba-1 和 p-p38 MAPK 蛋白表达的荧光密度显著降                       n＝6）
        低（P＜0.05），表明8-OaS可抑制小胶质细胞的活化。                      Tab 3 Protein expressions of Iba-1，p-p38 MAPK，
        2.4 各组大鼠脊髓背角内相关蛋白的表达水平检测                                   IL-6，IL-1 β and TNF-α in the spinal dorsal
            采用 Western blotting 法检测。第二批大鼠末次给                       horn of rats in each group（x±±s，n＝6）
        药后，各组取剩余 6 只大鼠腹腔注射 7％水合氯醛（0.4                      组别      Iba-1/β-actin p-p38 MAPK/p38 MAPK IL-6/β-actin IL-1β/β-actin TNF-α/β-actin
                                                           假手术组     0.62±0.25  0.93±0.21  0.71±0.35  0.88±0.38  1.04±0.42
        mL/kg）麻醉，迅速开胸，沿心尖位置扎入灌注针，打开灌
                                                           模型组      1.82±0.73 ＊  2.35±1.02 ＊  1.92±0.69 ＊  1.68±0.66 ＊  1.98±0.82 ＊
        注阀门用0.01 mol/L的PBS迅速冲出大鼠体内血液。待                     8-OaS组   0.94±0.33 #  1.62±0.85 #  1.05±0.42 #  1.13±0.37 #  1.01±0.46 #
        其肝脏发白时，于冰上迅速取出脊髓L4～L6节段，迅速                             注：与假手术组比较，P＜0.05；与模型组比较，P＜0.05
                                                                                              #
                                                                             ＊
                                                                                     ＊
                                                                                                        #
        分离脊髓背角，置于事先溶解有蛋白酶抑制剂和磷酸酶                               Note：vs. sham operation group， P＜0.05，vs. model group，P＜
        抑制剂的强效裂解液中，静置10 min后采用超声组织裂                        0.05
        解仪将组织裂解，以3 000 r/min离心5 min，取上清液进                      由图3和表3可知，与假手术组比较，模型组大鼠脊
        行蛋白定量。取蛋白进行变性处理，然后进行 SDS-                          髓背角内Iba-1、p-p38 MAPK、IL-6、IL-1β、TNF-α蛋白表
        PAGE电泳分离目的蛋白条带，以PVDF转膜后采用5％                        达水平均显著升高（P＜0.05）；与模型组比较，8-OaS 组
        脱脂奶粉封闭10 min，再依次加入小鼠抗Iba-1单克隆抗                     大鼠脊髓背角内Iba-1、p-p38 MAPK、IL-6、IL-1β、TNF-α
        体、兔抗p38 MAPK单克隆抗体、兔抗p-p38 MAPK单克                   蛋白表达水平均显著降低（P＜0.05）。
        隆抗体、小鼠抗 IL-6 多克隆抗体、小鼠抗 IL-β多克隆抗                    3 讨论
        体、兔抗TNF-α多克隆抗体及小鼠抗β-actin抗体（稀释比                        慢性炎性痛的发生机制尚不明确，目前被学者们较
        例为1∶500），封袋后摇床振荡4 h；用TBST漂洗10 min×                 为认可的是炎症机制和代谢机制               [9-11] 。其中炎症机制主
        3次，对应加入HRP标记的驴抗小鼠IgG和HRP标记的                        要涉及到脊髓背角内的小胶质细胞和星形胶质细胞，两
        驴抗兔 IgG（稀释比例为 1 ∶ 1 000），室温振荡 1 h；用                者在慢性炎性痛的发生和发展过程中扮演着重要的
        TBST漂洗10 min×3次，加入ECL液进行反应。采用全                     角色。
        能型成像系统扫描条带，以β-actin或p38 MAPK为内参，                       相关研究表明，在慢性炎性痛模型大鼠中，脊髓背
        采用Image Pro Plus 6.0软件分析各条带相对灰度值，用                 角内小胶质细胞和星形胶质细胞会依次被激活，小胶质
        来表示目标蛋白的表达水平。各组大鼠脊髓背角内                             细胞犹如星形胶质细胞激活的“阀门”，一旦开启便是疼
        Iba-1、p-p38 MAPK、IL-6、IL-1β及 TNF-α蛋白表达的电           痛慢性化的开始        [12-13] ，因此，小胶质细胞又被称为慢性炎
        泳图见图3，蛋白表达水平测定结果见表3。                               性痛的“先锋”。p-p38 MAPK信号通路是激活小胶质细
                                                           胞的重要通路，相关研究表明，慢性炎性痛模型大鼠或
              Iba-1                            17 kD
                                                           小鼠脊髓背角内小胶质细胞中的p-p38 MAPK水平显著
             β-actin                           43 kD
                                                           增 加 ，而 给 予 p38 MAPK 抑 制 剂 可 显 著 降 低 p-p38
          p-p38 MAPK                           43 kD       MAPK的表达水平进而抑制小胶质细胞的活化                    [14-18] 。在
           p38 MAPK                            40 kD       慢性炎性痛过程中，活化的小胶质细胞会进一步分泌大
                                                           量的促炎因子如IL-6、IL-1β、TNF-α等，从而加重炎症反
               IL-6                            24 kD
                                                           应 。
                                                             [5]
             β-actin                           43 kD
                                                               8-OaS 是从中药独一味中分离的单体成分，前期研
              IL-1β                            35 kD       究已证实其具有一定的镇痛作用               [6-7] 。基于此，采用足底
             β-actin                           43 kD       皮下注射完全弗氏佐剂复制大鼠慢性炎性痛模型，考察
                                                           8-OaS 对大鼠足底疼痛阈值的影响，以及小胶质细胞中
             TNF-α                             25 kD
                                                           p-p38 MAPK 的 表 达 情 况 和 脊 髓 背 角 内 Iba-1、p-p38
             β-actin                           43 kD
                                                           MAPK、IL-6、IL-1β及 TNF-α蛋白的相对表达水平。结
                   假手术组       模型组      8-OaS组
        图 3  各组大鼠脊髓背角内 Iba-1、p-p38 MAPK、IL-6、              果显示，鞘内给予8-OaS可有效降低弗氏完全佐剂诱导
             IL-1β、TNF-α蛋白表达的电泳图                           的慢性炎性痛，且呈剂量依赖趋势，其ED50为18.87 μg/kg；
        Fig 3  Electrophoregrams of protein expressions of  p-p38 MAPK主要表达在Iba-1阳性表达的细胞（即胶质
               Iba-1，p-p38 MAPK，IL-6，IL-1β and TNF-α       细胞）中，并且随着小胶质细胞的活化其表达呈升高趋
               in the spinal dorsal horn of rats in each group  势；在给予8-OaS后，可降低小胶质细胞的活性，且可显


        中国药房    2020年第31卷第13期                                             China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 13  ·1587  ·
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