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2.4.3 重复性试验 精密称取编号为 S7 的药材样品 6 280
260
份，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，再按“2.1”项下色 240
220
谱条件进样测定，记录色谱图。以11号峰（柳穿鱼叶苷 200
180
峰）为参照峰，计算得各特征峰的相对保留时间及相对 160
140
峰面积的 RSD 均小于 3％（n＝6），表明该方法的重复性 mAU 120
100
良好。 80
60
2.5 HPLC特征图谱研究 40
20
2.5.1 HPLC 特征图谱的建立 按“2.3”项下方法分别 0
0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 70 75
制备10批大蓟药材、叶、花、主茎、侧茎的供试品溶液，按 t，min
A.大蓟药材
“2.1”项下色谱条件进行测定，记录色谱图。采用《中药 280
260
色谱指纹图谱相似度评价系统》（2012A版）分别进行色 240
220
谱峰匹配，建立大蓟药材及不同药用部位的特征图谱。 200
180
以S1号图谱作为参照图谱，设置时间窗宽度为0.1 min， mAU 160
140
通过多点校正、全谱峰匹配分别生成10批大蓟药材、叶、 120
100
花、主茎和侧茎的共有特征图谱，同时采用中位数法分 80
60
别生成对照特征图谱。10批大蓟药材、叶、花、主茎和侧 40
20
茎的共有特征图谱详见图1，对照特征图谱详见图2。 0 0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 70 75
2.5.2 HPLC 特征图谱的分析 由图 2 显示，大蓟不同 t，min
B.叶
药用部位对照特征图谱存在明显差异。大蓟花和叶的 360
340
320
对照特征图谱中均具有与大蓟药材相同的15个特征峰； 300
280
大蓟主茎和侧茎征特对照图谱中均有4个共有峰（峰7、 260
240
220
9、12、13）缺失，提示这 4 个特征峰为大蓟花和叶的主要 mAU 200
180
160
标志成分，确定的11个特征峰同时也为花和叶所共有。 140
120
100
采用SPSS 20.0软件对10批大蓟药材及不同药用部 80
60
40
位特征峰的峰面积进行单因素方差分析。结果显示，大 20 0
0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 70 75
蓟药材与叶以及大蓟主茎与侧茎的各特征峰峰面积差 t，min
C.花
异均无统计学差异（P＞0.05），但大蓟药材与花的特征 260
240
峰 11 和 12，与主茎的特征峰 7、9～13，以及与侧茎的特 220
200
征峰 5、7、9、12、13 的峰面积差异均有统计学意义（P＜ 180
160
0.05）；大蓟叶与花的特征峰6、9～13、15，以及与主茎和 mAU 140
侧茎的特征峰 6、7、9～13、15 的峰面积差异均有统计学 120
100
80
意义（P＜0.05）；大蓟花与主茎的特征峰7、9、12～14，以 60
及与侧茎的特征峰7、9、12、13的峰面积差异均有统计学 40
20
意义（P＜0.05），这表明大蓟不同药用部位之间化学成 0 0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 70 75
t，min
分的含量差异较大。10 批大蓟不同药用部位特征图谱 D.主茎
共有峰峰面积的方差分析结果详见表2。 240
220
2.5.3 色谱峰的指认 取“2.2”项下混合对照品溶液，按 200
180
“2.1”项下色谱条件进样测定，记录色谱图。通过与对照 160
140
品图谱比对，指认了峰1为新绿原酸、峰2为绿原酸、峰3 mAU 120
100
为隐绿原酸、峰10为蒙花苷、峰11为柳穿鱼叶苷。混合 80
60
对照品溶液的色谱图详见图3。 40
20
2.6 化学模式识别研究 0
0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 70 75
2.6.1 主成分分析 主成分分析是一种多元统计分析 t，min
E.侧茎
方法，其利用方差最大原则，可对原始数据中的多个自
图1 10批大蓟药材、叶、花、主茎和侧茎的共有特征图谱
变量进行数据的降维，寻找少数几个由原始变量线性组 Fig 1 Common characteristic chromatogram of me-
合的主成分，然后采用少数综合变量来代替原始的众多 dicinal material，leaves，flower，main stem
变量，常被用来筛选含复杂组分的不同样本间具有显著 and lateral stem of 10 batches of C. japonicum
·822 · China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 7 中国药房 2020年第31卷第7期