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猪苓多糖的PMP柱前衍生化-HPLC指纹图谱研究 Δ

赖戈娜 ，贾文玉，罗思婉，周昌园，黎 雄，张 娴，曾 星（广东省中医院/广州中医药大学第二临床医学院，广
＊
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州 510006）

中图分类号 R282；R917 文献标志码 A 文章编号 1001-0408（2020）07-0788-06
DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2020.07.05

摘 要 目的：建立猪苓多糖的柱前衍生化-高效液相色谱（HPLC）指纹图谱，并测定其主要单糖组分含量，为猪苓药材的质量评
价提供参考。方法：11批不同产地猪苓药材经水提醇沉、Sevage除蛋白后得到猪苓多糖。多糖经三氟乙酸（TFA）水解和1-苯基-3-
甲基-5-吡唑啉酮（PMP）衍生化后，进行HPLC分析。色谱柱为HypersiL BDS C18，流动相为0.1 mol/L磷酸盐缓冲液（pH 6.84）-乙
腈（84 ∶ 16，V/V），检测波长为254 nm，柱温为30 ℃，流速为1 mL/min，进样量为20 µL。采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》
（2012A版）建立11批多糖样品的指纹图谱并进行相似度评价，通过与对照品比对进行色谱峰指认，再采用SPSS 23.0软件进行聚
类分析，并测定多糖中主要单糖组分的含量。结果：11批猪苓多糖样品HPLC指纹图谱中共呈现出3个共有峰，分别指认为甘露
糖、葡萄糖和半乳糖，各批次样品的相似度均大于0.94。聚类分析将11批多糖样品分为3类，药材编号为S1～S6、S8的样品聚为
一类，药材编号为S7、S10、S11的样品聚为一类，药材编号为S9的样品单独聚为一类。含量测定结果显示，11批样品中甘露糖含
量为 1.571～8.771 mg/g、葡萄糖含量为 26.072～132.194 mg/g、半乳糖含量为 3.420～36.593 mg/g。结论：本研究建立的柱前衍生
化-HPLC指纹图谱方法可为猪苓的药材质量评价提供参考；不同批次猪苓多糖中单糖组成相同，指纹图谱特征峰与药材的产地无
明显相关性，药材之间的单糖含量存在明显差异。
关键词 猪苓多糖；单糖；1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮；柱前衍生化；高效液相色谱法；指纹图谱

Study on PMP Pre-column Derivatization-HPLC Fingerprint of Polyporus Polysaccharide
LAI Gena，JIA Wenyu，LUO Siwan，ZHOU Changyuan，LI Xiong，ZHANG Xian，ZENG Xing（Guangdong
Province Hospital of TCM/The Second Clinical Medical College，Guangzhou University of TCM，Guangzhou
510006，China）

ABSTRACT OBJECTIVE： To establish pre-column derivatization-HPLC fingerprint of Polyporus polysaccharide， and to
determine the contents of main monosaccharide components，so as to provide reference for quality evaluation of Polyporus
umbellatus. METHODS：Polyporus polysaccharide was extracted with boiling water and precipitated by ethanol and deproteinized
by Sevage from 11 batches of P. umbellatus from different producing areas. The samples were firstly hydrolyzed with
trifluoro-acetic acid（TFA）and then derivatized by 1-phenyl-3-methyl-5-pyrazolone（PMP）. HPLC analysis was then conducted.
The determination was carried out on HypersiL BDS C18 column with mobile phase composed of 0.1 mol/L phosphate buffer（pH
6.84）-acetonitrile（84 ∶ 16，V/V）by gradient elution at the flow rate of 1.0 mL/min. The detection wavelength was set at 254 nm，
and column temperature was 30 ℃. The sample size was 20 µL. The similarity of 11 batches of Polyporus polysaccharide was
evaluated by using TCM Chromatographic Fingerprint Similarity Evaluation System（2012A edition），and the contents of main

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Δ 基金项目：国家自然科学基金资助项目（No.81573769）；广东省
apoptosis of osteosarcoma cells by caspase-3 activation
中医院中医药科学技术研究专项（No.YN2019MJ02）
＊硕士研究生。研究方向：中药大分子物质基础及其吸收机制。 via targeting Bcl-2[J]. Biomed Pharmacother，2016.DOI：
E-mail：1115461221@qq.com 10.1016/j.biopha.2016.03.001.
# 通信作者：研究员，博士生导师，博士。研究方向：中药基础药 （收稿日期：2019-10-08 修回日期：2019-12-29）
理与临床。电话：020-39318571。E-mail：zengxing-china@163.com （编辑：邹丽娟）

·788 · China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 7 中国药房 2020年第31卷第7期