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离心管中，加水稀释至500 µL，按“2.3”项下方法进行衍 表6 加样回收率测定结果（n＝6）
生化，制备系列质量浓度的样品溶液，然后分别按“2.4” Tab 6 Results of recovery rate（n＝6）
项下色谱条件进样测定，记录峰面积。以3种单糖的质 成分 样品含量，μg 加入量，μg 测得量，μg 加样回收率，％ 平均加样回收率％ RSD，％
甘露糖 13.61 15.45 28.85 98.46 99.44 2.01
量浓度（x，µg/mL）为横坐标、峰面积（y）为纵坐标进行回
13.56 15.45 29.12 100.81
归分析。结果，甘露糖、葡萄糖、半乳糖在各自质量浓度 13.77 15.45 29.45 101.67
范围内线性关系均良好（r均大于0.999 0），详见表5。 13.68 15.45 29.22 100.66
13.65 15.45 28.94 98.83
表5 3种单糖成分的线性关系 13.58 15.45 28.52 96.24
Tab 5 Linear relationship of 3 kinds of monosaccha- 葡萄糖 424.19 425.68 847.25 99.38 98.77 1.66
425.56 425.68 846.16 98.81
rides
424.42 425.68 854.55 101.05
成分 回归方程 r 线性范围，μg/mL 424.78 425.68 838.73 97.24
甘露糖 y＝186.22x－46.95 0.999 1 1.155～46.182 424.26 425.68 835.32 96.55
葡萄糖 y＝148.46x－141.80 0.999 6 1.134～45.364 424.75 425.68 848.61 99.57
半乳糖 y＝165.99x－231.57 0.999 4 1.152～46.091 半乳糖 97.29 95.46 189.73 96.90 97.57 2.03
97.49 95.46 191.46 98.47
2.6.2 定量限和检测限 取“2.2.1”项下混合对照品溶
97.33 95.46 193.65 100.88
液，加水倍比稀释，按“2.3”项下方法进行衍生化，然后按 97.65 95.46 189.52 96.32
“2.4”项下色谱条件进行测定，以信噪比10∶1、3∶1分别计 97.26 95.46 190.49 97.71
97.72 95.46 188.45 95.16
算定量限、检测限。结果，甘露糖、葡萄糖、半乳糖的定
磷酸盐缓冲液（19 ∶ 81、16 ∶ 84、13 ∶ 87，V/V）]、不同流速
量限分别为0.045 6、0.092 4、0.092 2 μg/mL，检测限分别
（0.8、0.9、1.0 mL/min）、不同柱温（25、30、35 ℃）对 3 种
为0.022 8、0.030 8、0.026 3 μg/mL。
单糖含量测定结果的影响。结果，3 种变化条件下甘露
2.6.3 重复性试验 精密称取同一批样品（药材编号：
糖含量的 RSD 分别为 0.76％、1.50％、0.82％（n＝3），葡
S1）6份，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，再按“2.3”
萄糖含量的 RSD 分别为 1.42％、1.65％、0.26％（n＝3），
项下方法进行衍生化，然后按“2.4”项下色谱条件进样测
半乳糖含量的 RSD 分别为 0.39％、2.01％、1.18％（n＝
定，记录峰面积，并根据回归方程计算样品中3种单糖的
3），RSD 均小于 3％，表明本方法的耐用性较好，详见
含量。结果，甘露糖、葡萄糖、半乳糖的平均含量分别为
表7。
3.568、47.332、17.671 mg/g，RSD 分别为 4.33％、2.77％、
表7 耐用性试验结果
3.32％（n＝6），表明本方法的重复性良好。
Tab 7 Results of durability tests
2.6.4 稳定性试验 取“2.3”项下同一批衍生化处理的
甘露糖 葡萄糖 半乳糖
供试品溶液（药材编号：S1），分别于室温下放置 0、2、4、 考察项目 含量， RSD， 含量， RSD， 含量， RSD，
8、10、12 h 时按“2.4”项下色谱条件进样测定，记录峰面 mg/g ％ mg/g ％ mg/g ％
流动相比例（V/V）乙腈-磷酸盐缓冲液（19∶81） 3.534 0.76 47.884 1.42 16.966 0.39
积。结果，甘露糖、葡萄糖、半乳糖峰面积的RSD分别为 乙腈-磷酸盐缓冲液（16∶84） 3.588 47.868 16.885
4.81％、4.30％、4.49％（n＝6），表明该溶液在室温条件下 乙腈-磷酸盐缓冲液（13∶87） 3.564 46.712 16.836
流速，mL/min 0.8 3.521 1.50 47.761 1.65 16.674 2.01
放置12 h内稳定性良好。
0.9 3.481 49.259 16.937
2.6.5 加样回收率试验 取“2.2.2”项下已知含量的供 1.0 3.586 48.034 17.350
试品溶液（药材编号：S1）6 份，每份 1 mL，每份加入 柱温，℃ 25 3.501 0.82 46.993 0.26 16.743 1.18
30 3.520 47.238 16.922
15.45 μg/mL 的甘露糖、425.68 μg/mL 的葡萄糖、95.46 35 3.558 47.131 17.142
μg/mL的半乳糖对照品溶液各1 mL（按“2.2.1”项下方法 2.6.7 样品含量测定 按上述所建立的 PMP 柱前衍生
重新制备），按“2.3”项下方法进行衍生化后，再按“2.4” 化HPLC法测定11批次猪苓多糖各单糖含量，每个样品
项下色谱条件进样测定，记录峰面积，根据回归方程计 重复测定3次。结果，11批样品中甘露糖含量在1.571～
算各成分的含量并计算其回收率。结果，甘露糖、葡萄 8.771 mg/g 之间、半乳糖含量在 3.420～36.593 之间、葡
糖、半乳糖的平均加样回收率分别为 99.44％、98.77％、 萄糖含量在 26.072～132.194 mg/g 之间；不同批次多糖
97.57％，RSD分别为2.01％、1.66％、2.03％（n＝6），表明 的单糖含量存在明显差异，但葡萄糖含量均为最高，其
该方法准确度较好，详见表6。 次是半乳糖，含量最低的为甘露糖。以半乳糖的摩尔质
2.6.6 耐用性试验 取“2.2.2”项下供试品溶液（药材编 量为基准1计算各批次多糖的单糖组成摩尔比，得到甘
号：S1）适量，按“2.3”项下方法衍生化，在其它色谱条件 露糖、半乳糖、葡萄糖的摩尔比在（0.202～0.459）∶ 1 ∶
同“2.4”项下不变的情况下，考察不同流动相比例[乙腈- （2.696～8.215）之间。11 批样品中 3 种单糖含量测定结

·792 · China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 7 中国药房 2020年第31卷第7期