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测定11批次猪苓多糖纯度，得到各批次药材样品（药材
400
编 号 ：S1～S11）多 糖 纯 度 分 别 为 43.00％ 、54.51％ 、 300 PMP
56.05％、52.20％、58.08％、56.60％、60.85％、45.71％、 mAU 200
100 甘露糖 葡萄糖 半乳糖
51.19％、50.30％、57.74％。 0
15
2.2 溶液的制备 0 5 10 t，min 20 25 30
2.2.1 混合对照品溶液的制备 精密称取甘露糖对照 A.衍生化处理的混合对照品溶液
PMP
品 5.08 mg、葡萄糖对照品 4.99 mg、半乳糖对照品 5.07
400
mg，分别用水溶解后定容至 5 mL 量瓶中，充分摇匀，得
300
各成分单一对照品溶液。分别取各单一对照品溶液 1 mAU 200
mL至同一10 mL量瓶中，加水定容至刻度，即得混合对 葡萄糖
100
照品溶液。 甘露糖 半乳糖
0
2.2.2 供试品溶液的制备 精密称取猪苓多糖20 mg于 0 5 10 15 20 25 30
t，min
安瓿瓶中，加入3 mol/L的TFA溶液6 mL溶解，于110 ℃ B.衍生化处理的供试品溶液
下水解6 h，放冷后，减压浓缩至干；再加入1 mL甲醇，蒸 PMP
400
干，重复 4 次以除尽 TFA；干燥物加入 20 mL 水溶解，即
300
得供试品溶液，保存备用。
2.2.3 阴性对照溶液的制备 称取 20 mg 猪苓多糖（药 mAU 200
100
材编号：S1）溶于20 mL水中，制备成未经水解的阴性对
0
照溶液。 0 5 10 15 20 25 30
t，min
2.3 衍生化处理 C.衍生化处理的阴性对照溶液
分别精密移取“2.2”项下混合对照品溶液、供试品溶 图1 高效液相色谱图
液、阴性对照溶液各 500 µL，加入 0.3 mol/L 的 NaOH 溶 Fig 1 HPLC chromatograms
液 200 µL、0.5 mol/L 的 PMP 甲醇溶液 200 µL，充分混
2.5.2 重复性试验 精密称取同一批号（药材编号：S1）
匀，在 70 ℃水浴中衍生化反应 60 min；放冷，加入 0.3
的猪苓多糖样品 6 份，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶
mol/L 的 HCl 溶液 200 µL 中和 NaOH，再加入氯仿 1 mL
液后，再按“2.3”项下方法进行衍生化，然后按“2.4”项下
充分萃取，重复萃取 3 次后，取上层水层液，经 0.22 µm
色谱条件进样测定，记录峰面积。以葡萄糖峰（峰 2）为
滤膜滤过，即得各衍生化溶液。
参照峰，计算得各共有峰相对保留时间的 RSD 均小于
2.4 色谱条件与系统适用性试验
1％（n＝6）、相对峰面积的 RSD 均小于 3％（n＝6），表明
色 谱 柱 ：HypersiL BDS C18 （250 mm × 4.6 mm，5
该方法重复性良好。
µm）；流动相：0.1 mol/L 磷酸盐缓冲液（pH 6.84）-乙腈 2.5.3 稳定性试验 称取猪苓多糖样品（药材编号：S1）
（84 ∶ 16，V/V）；检测器：紫外检测器；检测波长：254 nm； 适量，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液后，再按“2.3”
柱温：30 ℃；流速：1 mL/min；进样量：20 µL。取按“2.3” 项下方法进行衍生化，然后分别于室温条件下放置0、2、
项下方法衍生化处理的混合对照品溶液、供试品溶液 4、8、10、12 h 时按“2.4”项下色谱条件进样测定，记录峰
（药材编号：S1）和阴性对照溶液，分别按上述色谱条件 面积。以葡萄糖峰（峰 2）为参照峰，计算得各共有峰相
进样分析，记录色谱图。结果，在该色谱条件下，各成分 对保留时间的 RSD 均小于 1％（n＝6）、相对峰面积的
均能达到基线分离，各成分峰间分离度均大于1.5，理论 RSD 均小于 3％（n＝6），表明供试品溶液在室温下放置
板数以甘露糖计不低于 8 000，且阴性对照溶液不干扰 12 h内稳定。
样品峰的测定。色谱图详见图1。 2.5.4 指纹图谱的生成 取11批猪苓多糖样品，分别按
2.5 HPLC指纹图谱的建立与分析 “2.2.2”项下方法制备供试品溶液后，再按“2.3”项下方法
2.5.1 精密度试验 取“2.2.1”项下混合对照品溶液，按 进行衍生化，然后按“2.4”项下色谱条件进样测定，记录
“2.3”项下方法进行衍生化后，按“2.4”项下色谱条件连 色谱图。将11批样品的色谱图导入《中药色谱指纹图谱
续进样6次，记录峰面积。以葡萄糖峰（峰2）为参照峰， 相似度评价系统》（2012A 版）中，选择 S1 号样品的图谱
计算得各共有峰相对保留时间的 RSD 均小于 1％（n＝ 作为参照图谱（S1 号图谱各峰分离完全、信号强度大），
6）、相对峰面积的 RSD 均小于 3％（n＝6），表明仪器精 设置时间窗宽度为 0.2 min，图谱间距为 40，通过多点校
密度良好。 正及自动匹配生成 11 批衍生化处理的猪苓多糖的叠加

·790 · China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 7 中国药房 2020年第31卷第7期