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对茯苓总蛋白提取率的影响。结果显示，总蛋白含量可                                版社，2007：98.
        随氢氧化钠溶液浓度的升高而呈先上升后下降的趋势，                           [ 2 ]  王利亚.茯苓的开发与应用[J].食品科技，1997，4（8）：
        且当氢氧化钠溶液浓度为0.4 mol/L 时，提取的总蛋白含                          16-17.
        量最高，推测其原因可能为氢氧化钠浓度过大会导致蛋                           [ 3 ]  张钟媛.茯苓药理作用研究进展[J].继续医学教育，2015，
        白变性，溶解度降低；当料液比为 1 ∶ 35（g/mL）时，提取                        29（5）：108-109.
        的蛋白含量最高，且随着料液比的增加，蛋白含量无明                           [ 4 ]  胡朝暾，肖毅，周鹏飞，等.茯苓多糖的提取及其抑菌研
        显变化；考虑到实际成本，设置料液比为1∶35（g/mL）。                           究[J].怀化学院学报，2012，31（8）：15-18.
        3.2 蛋白含量测定方法的选择                                    [ 5 ]  卢华杰，卢燕，刘焱文.茯苓多糖抗氧化作用研究[J].食品
            常用的蛋白定量测定方法有凯氏定氮法、双缩脲                               研究与开发，2014，35（23）：1-3.
                                   [17]
        法、考马斯亮蓝G-250比色法等 。有研究发现，凯氏定                        [ 6 ]  王颜佳.茯苓抗肿瘤、免疫调节药理作用研究及应用[J].
                                                                海峡药学，2014，26（5）：16-18.
        氮法易受测定体系中其他含氮化合物的干扰，无法测定
                                                           [ 7 ]  张瑜.桂枝茯苓丸加味治疗乙肝肝纤维化（瘀血阻络型）
                  [18]
        准确的含量 。故本研究比较了双缩脲法和考马斯亮
                                                                的临床观察[D].郑州：河南中医药大学，2016.
        蓝G-250比色法，发现前者由于灵敏度低，不适合茯苓总
                                                           [ 8 ]  CHANG HH，YEH CH，SHEU F. A novel immunomodula-
        蛋白的测定。考马斯亮蓝G-250比色法的原理为蛋白与
                                                                tory protein from Poria cocos induces Toll-like receptor
        染料结合生成深蓝色的结合物，后者在595 nm波长处有
        最大吸收值，具灵敏度高、抗干扰性强的特点 ，并具有                               4-dependent activation within mouse peritoneal macro-
                                               [17]
                                                                phages[J]. J Agric Food Chem，2009，57（14）：6129-6139.
        一定的专属性，因此采用此法进行茯苓总蛋白的定量测
                                                           [ 9 ]  李洪波，杨瑞雪，陈静，等.茯苓免疫调节蛋白-1抗体的制
        定。笔者在研究中发现，当茯苓蛋白样品加入呈酸性的
                                                                备及分析[J].中草药，2014，45（20）：2912-2916.
        考马斯亮蓝G-250显色剂时会立刻导致茯苓酸性多糖析
                                                           [10]  MAITI S，BHUTIA SK，MALLICK SK，et al. Antiprolifer-
        出，且沉淀显蓝色，离心后的上清液在595 nm波长处检
                                                                ative and immunostimulatory protein fraction from edible
        测的吸光度为负值，故可推断茯苓中蛋白与酸性多糖结
                                                                mushrooms[J]. Environ Toxicol Pharmacol，2008，26（2）：
        合在一起形成了糖蛋白。针对加入显色剂出现沉淀而                                 187-191.
        导致无法检测的问题，本研究对提取茯苓总蛋白氢氧化                           [11]  MORADALI MF，MOSTAFAVI H，GHODS S，et al. Im-
        钠溶液浓度及提取液稀释倍数进行了探索；同时考虑到                                munomodulating and anticancer agents in the realm of
        不同产地茯苓中总蛋白含量可能存在较大差异，导致吸                                macromycetes fungi（macrofungi）[J]. Int Immunopharma-
        光度偏大或偏小，最终确定将样品稀释5倍，并确保加入                               col，2007，7（6）：701-724.
        显色剂后 20 min 内样品稳定，解决了采用考马斯亮蓝                       [12]  欧力，孔令义.苦瓜中植物蛋白的研究概况[J].中草药，
        G-250 比色法测定茯苓中总蛋白含量有沉淀析出的                               2001，32（10）：88-90.
        难题。                                                [13]  赖莹，夏薇，袁源，等.杏仁蛋白降血脂功能的研究[J].中
        3.3  不同产地茯苓中总蛋白含量差异分析                                   国食物与营养，2011，17（4）：66-68.
            34批不同产地茯苓中总蛋白含量测定结果显示，不                        [14]  杨岚，尹火青，唐娟，等. 3个茯苓品种氨基酸与蛋白质的
        同产地茯苓中总蛋白含量存在差异，其含量范围为                                  含量比较[J].中国食物与营养，2018，24（6）：44-46.
        0.388 4％～1.129 7％，聚类分析可将其分为三大类，湖                   [15]  金秋阳，刘鑫宇，胡晶红.蛋白质的提取、分离与纯化研究
        北、云南、湖南和安徽4个茯苓主产区的总蛋白含量较其                               进展[J].山东化工，2017，46（14）：35-38.
        他产区高，其中湖北省英山县石头咀镇的茯苓总蛋白含                           [16]  石红伟.凯氏定氮法检测食物中蛋白质含量与误差分
        量最高。有研究指出，湖北、云南和安徽是茯苓的主产                                析[J].食品安全导刊，2016（33）：124.
        区，茯苓药材品质较好          [18-19] ，与本研究聚类分析结果一           [17]  王永刚，杨光瑞，马雪青，等.荧光光谱法和分子模拟技术
        致。本课题组前期研究结果显示，茯苓酸性多糖具有较                                研究考马斯亮蓝 G-250 与牛血清白蛋白的相互作用[J].
        强的免疫调节功能 ，本研究又发现茯苓总蛋白可能与                                光谱学与光谱分析，2017，37（8）：2474-2479.
                        [20]
        酸性多糖结合形成糖蛋白，由此推测茯苓酸性多糖可能                           [18]  张越，尹孝莉，常月月，等.不同主产区中药材茯苓中二氧
        以糖蛋白形式发挥免疫活性，而蛋白含量高低可能影响                                化硫和重金属的含量测定[J].中南药学，2019，17（10）：
        其药理活性，后续可对此进行深入研究。                                      1703-1706.
            综上所述，本法可用于茯苓中总蛋白含量的测定。                         [19]  陈卫东，彭慧，王妍妍，等.茯苓药材的历史沿革与变
        34批不同产地茯苓中总蛋白含量存在一定差异，其中以                               迁[J].中草药，2017，48（23）：5032-5038.
                                                           [20]  邓媛媛.茯苓酸性多糖的提取工艺及其药效学研究[D].
        湖北英山县产茯苓的总蛋白含量最高，可为后续茯苓质
        量评价及活性研究提供参考。                                           武汉：湖北中医药大学，2012.
                                                                        （收稿日期：2019-09-11   修回日期：2019-11-15）
        参考文献
                                                                                                （编辑：唐晓莲）
        [ 1 ]  顾观光.神农本草经[M].杨鹏举，校注. 3版.北京：学苑出



        中国药房    2020年第31卷第6期                                               China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 6  ·695  ·
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