Page 59 - 202006
P. 59

（北京）有限公司]；Milli-Q型纯水系统（美国Millipore公                 作为检测波长，详见图1。
        司）；DZF-6050 型真空干燥箱（上海博讯实业有限公                               1.000
                                                                   0.900
        司）；KQ-500DE 型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器                              0.800
                                                                   0.700
        有限公司）；88-1型大功率磁力搅拌器（常州国华电器有                               吸光度  0.600
                                                                   0.500
        限公司）。                                                      0.400
                                                                   0.300
        1.2 药材与试剂                                                  0.200
                                                                   0.100
            分别收集来自全国8个省份不同地区不同种植田的                                 0
                                                                     300 350 400 450 500 550 600 650 700 750 800
        茯苓共 34 批（编号：S1～S34），经湖北中医药大学药学                                            波长，nm
                                                                                A. BSA标准品溶液
        院叶晓川教授鉴定均为多孔菌科真菌茯苓[P. cocos
                                                                   0.500
       （schw.）wolf]的干燥菌核。茯苓药材信息来源见表 1。                             0.450
                                                                   0.400
        牛血清白蛋白（BSA）标准品（批号：EZ2811E172，纯                             0.350
                                                                   0.300
        度 ：≥98.0％）、考 马 斯 亮 蓝 G-250 显 色 剂（批 号 ：                    吸光度  0.250
                                                                   0.200
        EZ2811F373）均购自赛国生物科技有限公司；无水乙醇、                             0.150
                                                                   0.100
        磷酸、氢氧化钠均为分析纯，水为超纯水。                                        0.050
                                                                   0
                     表1 茯苓药材信息来源                                     300 350 400 450 500 550 600 650 700 750 800
                                                                                  波长，nm
               Tab 1 Information source of P. cocos                              B.供试品溶液
        编号 产地              采收时间   编号 产地            采收时间                   图1 紫外吸收光谱图
        S1  湖北英山石头咀镇       2018.07  S18 云南大理市永平县   2018.04            Fig 1 UV absorption spectra
        S2  湖北英山石头咀镇       2018.11  S19 云南大理市永平县   2018.07
        S3  湖北英山石头咀镇       2018.11  S20 云南丽江永胜镇    2018.04  2.3  线性关系考察
        S4  湖北英山雷家店镇       2018.11  S21 云南景谷傣族彝族自治县  2018.07   分别精密吸取“2.1.1”项下BSA标准品溶液0、0.05、
        S5  湖北英山雷家店镇       2018.11  S22 云南宁洱哈尼族彝族自治县 2018.07  0.1、0.2、0.4、0.6 mL，置于10 mL试管中，加水至1.0 mL，
        S6  湖北英山吉利中药材公司种植基地 2018.11  S23 云南普洱市孟连县  2018.12
        S7  湖北罗田县九资河镇      2018.11  S24 云南保山腾冲市    2018.04  再分别加入考马斯亮蓝 G-250 显色剂 5 mL，混匀，以水
        S8  湖北罗田县九资河镇      2018.07  S25 云南保山腾冲市    2017.11  为空白，于595 nm波长处测定吸光度，以系列BSA标准
        S9  湖北罗田县九资河镇      2018.11  S26 云南保山腾冲市    2018.12  品溶液质量浓度（x，μg/mL）为横坐标、吸光度（y）为纵坐
        S10 湖北罗田县九资河镇      2018.11  S27 云南保山腾冲市    2018.12
        S11 湖北麻城县木子店镇      2017.09  S28 湖南怀化鹤城区    2018.04  标 进 行 线 性 回 归 。 结 果 ，BSA 的 回 归 方 程 为 y＝
        S12 湖北麻城县木子店镇      2018.11  S29 河南商城县黄柏山   2017.11  43.101x+0.036 6（r＝0.999 6），表明 BSA 质量浓度在
        S13 湖北恩施土家族苗族自治州利川市 2018.03  S30 安徽安庆岳西县   2017.07  1.45～17.40 μg/mL范围内与吸光度的线性关系良好。
        S14 云南楚雄大地基乡       2018.04  S31 安徽安庆岳西县    2018.12
        S15 云南楚雄大地基乡       2018.07  S32 贵州铜仁德江县    2018.07  2.4  精密度试验
        S16 云南楚雄猛虎乡        2018.12  S33 福建南平顺昌县    2017.10     精密吸取“2.1.1”项下BSA标准品溶液0.2 mL，置于
        S17 云南楚雄双柏县        2018.12  S34 广西岑溪马路镇    2018.07  10 mL试管中，加水至1.0 mL，加入考马斯亮蓝G-250显
        2 方法与结果                                            色剂 5 mL，混匀，以水为空白，于 595 nm 波长处连续测
        2.1  溶液的制备                                         定6次吸光度。结果，BSA吸光度的RSD为0.02％（n＝
        2.1.1 BSA 标准品溶液        取 BSA 标准品适量，精密称             6），表明仪器精密度良好。
        定，置于 10 mL 量瓶中，加水溶解，制成质量浓度为                        2.5  稳定性试验
        0.174 mg/mL 的 BSA 标准品溶液，于 4 ℃冰箱中保存，                    取“2.1.2”项下供试品溶液（编号：S1）适量，加入考
        备用。                                                马斯亮蓝 G-250 显色剂 5 mL，混匀，分别于室温下放置
        2.1.2  供试品溶液      取茯苓（编号：S1）适量，粉碎，过40              0、2、4、6、8、10、12、14、16、18、20 min时，以水为空白，于
        目筛。取上述粉末2 g，精密称定，加入0.4 mol/L氢氧化                    595 nm 波长处测定吸光度。结果，吸光度的 RSD 为
        钠溶液 70 mL，置于磁力搅拌器上搅拌 15 min，滤过，精                   1.58％（n＝11），表明供试品溶液在室温下放置20 min内
        密吸取续滤液 5 mL，置于 25 mL 量瓶中，加水稀释至刻                    稳定性良好。
        度，摇匀，即得供试品溶液。                                      2.6 重复性试验
        2.2 检测波长的确定                                            取茯苓样品（编号：S1）粉末 2 g，共 6 份，精密称定，
            分别精密吸取“2.1”项下BSA标准品溶液和供试品                      按“2.1.2”项下方法制备供试品溶液，加入考马斯亮蓝
        溶液各 1 mL，加入考马斯亮蓝 G-250 显色剂 5 mL，混                  G-250显色剂5 mL，混匀，以水为空白，于595 nm波长处
        匀，以水为空白，在 300～800 nm 波长范围内进行扫描，                    测定吸光度并按标准曲线法计算茯苓总蛋白的含量。
        考察其最佳吸收波长。结果，BSA标准溶液和供试品溶                          结果，茯苓总蛋白的平均含量为0.946 1％，RSD为2.74％
        液均在 595 nm 波长附近有最大吸收，因此选择 595 nm                   （n＝6），表明该方法重复性良好。


        中国药房    2020年第31卷第6期                                               China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 6  ·693  ·
   54   55   56   57   58   59   60   61   62   63   64