Page 60 - 202006
P. 60

2.7 加样回收率试验                                                            平均欧式距离(d)
                                                                    0     5     10    15     20    25
            取已知含量的茯苓样品(编号:S1)2 g ,共9份,精密                         S4
                                                                 S11
        称定,分别按已知蛋白含量的 80%、100%、120%加入                            S15
                                                                 S22
        BSA 标准品,按“2.1.2”项下方法制备供试品溶液,加入                           S27
                                                                 S32
                                                                 S29
        考马斯亮蓝 G-250 显色剂 5 mL,混匀,以水为空白,于                          S26
                                                                 S33
        595 nm 波长处测定吸光度并计算加样回收率,结果见                              S14
                                                                 S34
                                                                 S18
        表2。                                                      S6
                                                                 S10
                 表2 加样回收率试验结果(n=9)                               S1
                                                                 S8
                                                                 S5
               Tap 2 Results of recovery tests(n=9)              S19
                                                                 S9
                                                                 S31
                                     加样回收   平均加样回                S12
         取样量,g  样品含量,mg  加入量,mg  测得量,mg            RSD,%         S28
                                      率,%    收率,%                S30
          2.061 2  19.501  15.54  35.448  102.62                 S21
                                                                 S23
          2.059 5  19.485  15.66  35.813  104.26                 S25
                                                                 S7
          2.056 6  19.458  15.78  35.260  100.14                 S16
                                                                 S20
          2.060 2  19.492  18.94  38.681  101.32                 S17
                                                                 S24
          2.058 1  19.472  19.13  38.824  101.16  102.01  1.43   S13
                                                                 S2
          2.056 1  19.453  19.01  39.171  103.73                 S3
          2.057 6  19.467  23.59  43.136  100.33            图2 34批不同产地茯苓总蛋白含量的聚类分析树状图
          2.060 5  19.494  23.68  43.528  101.49            Fig 2 Cluster analysis dendrogram of total protein
          2.060 3  19.493  23.92  44.142  103.05
                                                                   content of in 34 batches of P. cocos from dif-
        2.8  不同产地茯苓中总蛋白的含量测定
                                                                   ferent producing areas
            取 34 批茯苓样品(编号:S1~S34)粉末 2 g,每批平
        行取 3 份,精密称定,按“2.1.2”项下方法制备供试品溶                      来自于湖北、云南、安徽和湖南;S4、S11、S14、S15、S18、
        液,然后加入考马斯亮蓝G-250显色剂5 mL,混匀,以水                       S22、S26、S27、S29、S32~S34 聚为一类,该类样品总蛋
        为空白,于595 nm处测定吸光度并按标准曲线法计算茯                         白含量相对较低(0.388 4%~0.601 2%),来自于湖北、
        苓总蛋白含量,结果见表3。                                       云南、河南、广西、福建和贵州。由此可知,湖北和部分
        表3    34批不同产地茯苓中总蛋白含量的测定结果(n=                       云南产茯苓总蛋白的含量明显高于其他产地,其中湖北
              3,%%)                                         省英山县石头咀镇的 3 个批次茯苓中总蛋白含量均
        Tab 3 Determination results of total protein contents  较高。
               in 34 batches of P. cocos from different produc-  3 讨论
               ing areas(n=3,%%)                            3.1  样品前处理条件的选择
          编号   蛋白含量   编号   蛋白含量   编号   蛋白含量   编号   蛋白含量         蛋白质的提取方法主要有回流提取法、酶提取法、
          S1   0.946 1  S11  0.600 9  S21  0.653 5  S31  0.712 1  超声波提取法、搅拌法等     [15-16] 。本课题组前期比较了超
          S2   1.048 5  S12  0.719 2  S22  0.576 0  S32  0.556 7  声波提取法和磁力搅拌法,结果发现磁力搅拌法可使茯
          S3   1.129 7  S13  0.770 3  S23  0.795 1  S33  0.443 3  苓粉末更加充分溶解,从而使试验更加准确、快捷,故选
          S4   0.601 2  S14  0.454 2  S24  0.762 2  S34  0.470 1
          S5   0.706 8  S15  0.600 0  S25  0.812 2          择磁力搅拌法。
          S6   0.882 8  S16  0.751 1  S26  0.433 0              本研究取茯苓样品(编号:S1),在料液比(1 ∶ 20,
          S7   0.750 6  S17  0.762 7  S27  0.580 1          g/mL)、提取溶剂浓度为 0.1 mol/L 的条件下,考察了不
          S8   0.933 1  S18  0.388 4  S28  0.678 3
          S9   0.708 3  S19  0.705 7  S29  0.531 1          同溶剂(盐酸、氢氧化钠、氯化钠)对茯苓总蛋白提取率
          S10  0.869 9  S20  0.743 3  S30  0.673 1          的影响。结果显示,以氢氧化钠溶液为溶剂时,茯苓总
        2.9 聚类分析                                            蛋白的提取效果最佳。笔者在研究中发现,茯苓粉碎成
            为评价茯苓产地与总蛋白含量的相关性,将34批茯                         粉末后,具有明显的疏水性,除碱性溶液外,其在超纯
        苓总蛋白含量测定结果代入 SPSS 22.0 软件,采用聚类                      水、酸性溶液和盐溶液中几乎提取不出蛋白,如杨岚等                      [14]
        分析法结合平均欧式距离(d)进行分析,生成 34 批不同                        采用水和50%乙醇为提取溶剂,所得水溶性蛋白约4.0×
        产地茯苓总蛋白含量的聚类分析树状图,详见图2。                             10 %~7.8×10 %,醇溶性蛋白约 4.38×10 %~6.11×
                                                                                                 -5
                                                                         -6
                                                              -6
                                                              -5
                                                                                                  -3
            由图 2 可知,当 d=10 时,34 批茯苓可聚分为 3 类,                10 %,与茯苓总蛋白含量相差甚远(1.7×10 %~2.5×
        其中 S2、S3 聚为一类,该类样品总蛋白含量最高(均>                        10 %),且测得的总蛋白含量也较低。
                                                              -3
        1%),均产于湖北省英山县石头咀镇;S1、S5~S10、S12、                        本研究又考察了不同浓度氢氧化钠溶液(0.1、0.2、
        S13、S16、S17、S19~S21、S23~S25、S28、S30、S31 聚为          0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0 mol/L)及不同料液比
        一类,该类样品总蛋白含量较高(0.653 5%~0.946 1%),                 (1 ∶ 15、1 ∶ 20、1 ∶ 25、1 ∶ 30、1 ∶ 35、1 ∶ 40、1 ∶ 45、1 ∶ 50,g/mL)

        ·694  ·  China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 6                                   中国药房    2020年第31卷第6期
   55   56   57   58   59   60   61   62   63   64   65