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2.7 加样回收率试验 平均欧式距离（d）
0 5 10 15 20 25
取已知含量的茯苓样品（编号：S1）2 g ，共9份，精密 S4
S11
称定，分别按已知蛋白含量的 80％、100％、120％加入 S15
S22
BSA 标准品，按“2.1.2”项下方法制备供试品溶液，加入 S27
S32
S29
考马斯亮蓝 G-250 显色剂 5 mL，混匀，以水为空白，于 S26
S33
595 nm 波长处测定吸光度并计算加样回收率，结果见 S14
S34
S18
表2。 S6
S10
表2 加样回收率试验结果（n＝9） S1
S8
S5
Tap 2 Results of recovery tests（n＝9） S19
S9
S31
加样回收 平均加样回 S12
取样量，g 样品含量，mg 加入量，mg 测得量，mg RSD，％ S28
率，％ 收率，％ S30
2.061 2 19.501 15.54 35.448 102.62 S21
S23
2.059 5 19.485 15.66 35.813 104.26 S25
S7
2.056 6 19.458 15.78 35.260 100.14 S16
S20
2.060 2 19.492 18.94 38.681 101.32 S17
S24
2.058 1 19.472 19.13 38.824 101.16 102.01 1.43 S13
S2
2.056 1 19.453 19.01 39.171 103.73 S3
2.057 6 19.467 23.59 43.136 100.33 图2 34批不同产地茯苓总蛋白含量的聚类分析树状图
2.060 5 19.494 23.68 43.528 101.49 Fig 2 Cluster analysis dendrogram of total protein
2.060 3 19.493 23.92 44.142 103.05
content of in 34 batches of P. cocos from dif-
2.8 不同产地茯苓中总蛋白的含量测定
ferent producing areas
取 34 批茯苓样品（编号：S1～S34）粉末 2 g，每批平
行取 3 份，精密称定，按“2.1.2”项下方法制备供试品溶 来自于湖北、云南、安徽和湖南；S4、S11、S14、S15、S18、
液，然后加入考马斯亮蓝G-250显色剂5 mL，混匀，以水 S22、S26、S27、S29、S32～S34 聚为一类，该类样品总蛋
为空白，于595 nm处测定吸光度并按标准曲线法计算茯 白含量相对较低（0.388 4％～0.601 2％），来自于湖北、
苓总蛋白含量，结果见表3。 云南、河南、广西、福建和贵州。由此可知，湖北和部分
表3 34批不同产地茯苓中总蛋白含量的测定结果（n＝ 云南产茯苓总蛋白的含量明显高于其他产地，其中湖北
3，％％） 省英山县石头咀镇的 3 个批次茯苓中总蛋白含量均
Tab 3 Determination results of total protein contents 较高。
in 34 batches of P. cocos from different produc- 3 讨论
ing areas（n＝3，％％） 3.1 样品前处理条件的选择
编号 蛋白含量 编号 蛋白含量 编号 蛋白含量 编号 蛋白含量 蛋白质的提取方法主要有回流提取法、酶提取法、
S1 0.946 1 S11 0.600 9 S21 0.653 5 S31 0.712 1 超声波提取法、搅拌法等 [15-16] 。本课题组前期比较了超
S2 1.048 5 S12 0.719 2 S22 0.576 0 S32 0.556 7 声波提取法和磁力搅拌法，结果发现磁力搅拌法可使茯
S3 1.129 7 S13 0.770 3 S23 0.795 1 S33 0.443 3 苓粉末更加充分溶解，从而使试验更加准确、快捷，故选
S4 0.601 2 S14 0.454 2 S24 0.762 2 S34 0.470 1
S5 0.706 8 S15 0.600 0 S25 0.812 2 择磁力搅拌法。
S6 0.882 8 S16 0.751 1 S26 0.433 0 本研究取茯苓样品（编号：S1），在料液比（1 ∶ 20，
S7 0.750 6 S17 0.762 7 S27 0.580 1 g/mL）、提取溶剂浓度为 0.1 mol/L 的条件下，考察了不
S8 0.933 1 S18 0.388 4 S28 0.678 3
S9 0.708 3 S19 0.705 7 S29 0.531 1 同溶剂（盐酸、氢氧化钠、氯化钠）对茯苓总蛋白提取率
S10 0.869 9 S20 0.743 3 S30 0.673 1 的影响。结果显示，以氢氧化钠溶液为溶剂时，茯苓总
2.9 聚类分析 蛋白的提取效果最佳。笔者在研究中发现，茯苓粉碎成
为评价茯苓产地与总蛋白含量的相关性，将34批茯 粉末后，具有明显的疏水性，除碱性溶液外，其在超纯
苓总蛋白含量测定结果代入 SPSS 22.0 软件，采用聚类 水、酸性溶液和盐溶液中几乎提取不出蛋白，如杨岚等 [14]
分析法结合平均欧式距离（d）进行分析，生成 34 批不同 采用水和50％乙醇为提取溶剂，所得水溶性蛋白约4.0×
产地茯苓总蛋白含量的聚类分析树状图，详见图2。 10 ％～7.8×10 ％，醇溶性蛋白约 4.38×10 ％～6.11×
－5
－6
－6
－5
－3
由图 2 可知，当 d＝10 时，34 批茯苓可聚分为 3 类， 10 ％，与茯苓总蛋白含量相差甚远（1.7×10 ％～2.5×
其中 S2、S3 聚为一类，该类样品总蛋白含量最高（均＞ 10 ％），且测得的总蛋白含量也较低。
－3
1％），均产于湖北省英山县石头咀镇；S1、S5～S10、S12、 本研究又考察了不同浓度氢氧化钠溶液（0.1、0.2、
S13、S16、S17、S19～S21、S23～S25、S28、S30、S31 聚为 0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0 mol/L）及不同料液比
一类，该类样品总蛋白含量较高（0.653 5％～0.946 1％）， （1 ∶ 15、1 ∶ 20、1 ∶ 25、1 ∶ 30、1 ∶ 35、1 ∶ 40、1 ∶ 45、1 ∶ 50，g/mL）

·694 · China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 6 中国药房 2020年第31卷第6期