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表 2 18 批样品中吗啡和磷酸可待因含量测定结果 者主要考察了甲醇-0.03 mol/L 醋酸钠（冰醋酸调节 pH
（mg/g，n＝2） 3.5）、甲醇-0.1％磷酸、乙腈-0.1％磷酸、乙腈-0.01 mol/L
Tab 2 Results of content determination of morphine 磷酸二氢钾（以 5％磷酸溶液调节 pH 至 2.7）等 4 种流动
and codeine phosphate in 18 batches of samples 相。结果显示，在乙腈及磷酸缓冲盐中吗啡和磷酸可待
（mg/g，n＝2） 因的出峰时间、峰形及样品峰的纯度最优，故最终采用
批号 吗啡 磷酸可待因 乙腈-0.01 mol/L磷酸二氢钾（以5％磷酸溶液调节pH至
20171106 1.34 0.23 2.7）作为流动相。
20171107 1.26 0.21 （2）检测波长的选择：结合紫外吸收光谱图以及二
20171202 0.97 0.16
20171204 1.14 0.18 极管阵列（DAD）检测器进行全波长扫描，结果发现吗啡
20171205 1.14 0.19 和磷酸可待因分别在 209、211 nm 波长处有最大吸收。
20180102 1.20 0.21 为简化现行质量标准，考虑同时测定2种成分，设定检测
20180301 1.17 0.24 波长为210 nm，在此条件下2个成分均有较好的吸收。
20180501 1.37 0.29
20180502 1.20 0.25 3.2.2 供试品溶液提取条件的选择
20180602 1.31 0.27 笔者分别考察了甲醇+氨水、乙酸乙酯+氨水和三氯
20180603 1.37 0.31 甲烷+氨水作为提取溶剂的提取效果。结果发现，以三
20180604 1.26 0.27 氯甲烷+氨水为提取溶剂时，吗啡和磷酸可待因的提取
20180605 1.20 0.23
20180608 1.14 0.21 效果最好，故最终确定三氯甲烷+氨水作为提取溶剂。
20180609 1.06 0.20 当氨水用量从 1 mL 增加到 4 mL 时，对 2 个成分的提取
20180610 1.03 0.19 效果变好；但随着氨水用量继续增加，提取效果无明显
20181107 1.00 0.34 变化，故最终确定供试品提取溶剂中氨水的用量为 4
20181204 0.97 0.37
mL。试验过程中，笔者还考察了超声时间（20、30、50
图谱中各斑点清晰、分离度好。在方法学研究中，笔者
min）对提取效果的影响。结果显示，在 30 min 内，随超
比较了不同厂家（青岛裕民源、青岛海洋化工、安徽良臣）
声时间的延长，吗啡和磷酸可待因的提取量明显上升；
薄层板以及在不同温度（4、25、40 ℃）、不同湿度（32％、
30 min后，2种成分基本提取完全，随着超声时间的继续
45％、72％）、不同点样量（2、5、10 µL）下的展开情况。
延长，2个成分的提取量无明显上升，故最终确定超声提
结果显示，色谱斑点与分离度均符合要求，耐用性良好。
取时间为30 min。
因此，确定上述条件为最终的吉祥草TLC鉴别条件。
3.3 含量限度的拟定
在桑白皮TLC鉴别试验中，笔者同样分别对样品的
2015年版《中国药典》（一部）规定，罂粟壳中吗啡含
提取方法（超声、水浴回流等）和提取溶剂（乙醇、甲醇、
[12]
量为 0.06％～0.40％ 。再根据咳清胶囊的处方（吉祥
饱和碳酸钠溶液等）等前处理条件进行了考察，并且对
草300 g、罂粟壳200 g、矮地茶150 g、虎耳草150 g、枇杷
二氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸（10 ∶ 4 ∶ 0.2，V/V/V）、三氯甲烷-
叶 150 g、桑白皮 50 g）和制法[取以上 6 味药材，加水煎
甲醇-甲酸（6 ∶ 1 ∶ 0.5，V/V/V）、乙酸乙酯-甲醇-浓氨试液 煮 2 次，每次 2 h，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度
（12 ∶ 2 ∶ 1，V/V/V）等展开剂进行了筛选。结果显示，采用
为1.20～1.25（40 ℃）的清膏，喷雾干燥。粉末加可压性
饱和碳酸钠溶液、超声的前处理方法和以乙酸乙酯-甲 淀粉 250 g，混匀，装入胶囊，制成 1 000 粒，每粒装 0.35
醇-浓氨试液（12 ∶ 2 ∶ 1，V/V/V）为展开剂时，各斑点清晰、 g，即得]计算得出咳清胶囊中吗啡的含量限度应为
分离度好。在方法学研究中，笔者比较了不同厂家（青 0.342 9～2.285 7 mg/g。本研究测得18批咳清胶囊样品
岛裕民源、青岛海洋化工、安徽良臣）薄层板以及在不同 中吗啡的含量范围为 0.97～1.37 mg/g，均在限度之内。
温度（4、25、40 ℃）、不同湿度（32％、45％、72％）、不同点 在现行质量标准基础上（每粒含磷酸可待因不得少于
样量（2、3、5 µL）下的展开情况，结果显示，色谱斑点与 25 μg），结合上述 18 批样品测定结果，暂定本品每粒含
分离度均符合要求，耐用性良好。因此，确定上述条件 罂粟壳以吗啡（C17H19O3N）计为0.10～0.75 mg，每粒含罂
为最终的桑白皮TLC鉴别条件。 粟 壳 以 磷 酸 可 待 因（C18H21NO3·H3PO4 ）计 为 0.025～
此外，笔者在前期研究中还对虎耳草、矮地茶进行 0.160 mg。
了 TLC 鉴别，结果发现在供试品色谱中，虽然在与各自 综上所述，笔者在咳清胶囊现行版质量标准 的基
[1]
对照药材色谱相应的位置上显相同颜色的斑点，但阴性 础上，增加了吉祥草、桑白皮的TLC鉴别，扩展了含量测
对照有干扰，经过多次试验后没有找到较好的TLC条件， 定项中的目标成分测定，建立的新方法可同时测定咳清
所以未能将虎耳草、矮地茶的TLC鉴别方法列入标准中。 胶囊中的吗啡、磷酸可待因的含量，且方法简便可行、准
3.2 HPLC含量测定方法的考察 确，重复性好。上述方法结合现行标准中已有的罂粟
3.2.1 色谱条件的选择 壳、枇杷叶 2 味药材的 TLC 鉴别，能够有效地提高咳清
（1）流动相的选择：通过查阅相关文献资料 [9-11] ，笔 胶囊的质量控制标准，可为该制剂用于临床的安全性、

中国药房 2020年第31卷第5期 China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 5 ·599 ·