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2.3 黄芪甲苷含量测定方法建立                                   好，详见表2。
        2.3.1  色谱条件      色谱柱为 Kromasil C18 （250 mm×4.6     2.3.5  检测限与定量限考察           精密吸取“2.3.2”项下对
        mm，5 μm）；流动相为乙腈-水（32 ∶ 68，V/V）；检测器为                照品溶液适量，加甲醇倍比稀释后，按“2.3.1”项下色谱
        ELSD，漂移管温度为 100 ℃；载气（空气）流量为 2.5                    条件连续进样测定 6 次，记录峰面积。当信噪比为 3 ∶ 1
        L/min；流速为 1.0 mL/min；柱温为 30 ℃；进样量为 10              时，得检测限；当信噪比为 10 ∶ 1 时，得定量限，结果见
        μL 。                                               表2。
          [14]
        2.3.2  溶液的制备 （1）对照品溶液制备。称取黄芪甲                      2.3.6  精密度试验       精密吸取“2.3.2”项下对照品溶液
        苷对照品适量，用甲醇溶解制成每 1 ml 含黄芪甲苷                         适量，按“2.3.1”项下色谱条件连续进样测定6次，记录色
        5.642 mg 的对照品贮备液；将该贮备液加甲醇稀释 10                     谱图。结果，黄芪甲苷峰面积的 RSD 为 0.67％（n＝6），
        倍，得到质量浓度为 564.2 μg/mL 的对照品溶液。（2）供                  表明仪器精密度良好。
        试品溶液制备。取冻干粉约1.0 g，精密称定，置于具塞                        2.3.7  稳 定 性 试 验     取 同 一 供 试 品 溶 液（批 号 ：
        锥形瓶中，精密加入甲醇50 mL，称定质量，超声处理30                       190615），分别于室温条件下放置 0、2、5、8、10、12 h 时，
        min，放冷，再称定质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀，                        按“2.3.1”项下色谱条件进行测定，记录色谱图。结果，
        滤过；精密量取续滤液 25 mL，蒸干，残渣加水 15 mL 使                   黄芪甲苷峰面积的RSD为1.15％（n＝6），表明供试品溶
        溶解；用水饱和的正丁醇振摇提取 4 次，每次 25 mL；合                     液在室温12 h内稳定性良好。
        并正丁醇液，用氨试液洗涤2次，每次40 mL；弃去氨液，                       2.3.8  重复性试验        取同一批冻干粉样品（批号：
        正丁醇液蒸干，残渣用甲醇溶解，转移至 5 mL 量瓶中，                       190615）6 份，按“2.3.2”项下方法制备供试品溶液，按
        加甲醇至刻度，摇匀，微孔滤膜（0.22 μm）滤过，取续滤                     “2.3.1”项下色谱条件进样测定，记录色谱峰，并按外标
        液，即得。（3）阴性样品溶液B制备。取阴性冻干粉B约                         法计算含量。结果，黄芪甲苷平均含量为 0.398 mg/g，
                                              [15]
        1.0 g，按上述供试品溶液制备方法制备，即得 。                          RSD为0.74％（n＝6），表明方法重复性良好。
        2.3.3  系统适用性试验         分别取“2.3.2”项下混合对照            2.3.9  加样回收率试验         取冻干粉样品（批号：190615）
        品溶液、供试品溶液和阴性样品溶液B，按“2.3.1”项色谱                      6份，每份约0.5 g，精密称定，分别置于具塞锥形瓶中，加
        条件下进样测定，记录色谱图。结果，在该色谱条件下，                          入黄芪甲苷对照品溶液适量，按“2.3.2”项下方法制备供
        黄芪甲苷与相邻峰间分离度均大于 1.5，其他成分对待                         试品溶液，按“2.3.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面
        测成分的测定无干扰，理论板数以黄芪甲苷计不低于                            积并计算黄芪甲苷的加样回收率。结果，黄芪甲苷平均
        4 000，色谱图见图2。                                      加样回收率为101.3％（RSD＝0.99％，n＝6），详见表4。
                                                                   表4   黄芪甲苷回收率试验结果（n＝6）
                                               黄芪甲苷        Tab 4   Results of the recovery test of astragaloside
            U，V  μ                                                （n＝6）
                                                     A
                                                            样品中含量，mg  加入量，mg  测得量，mg  回收率，％   平均回收率，％  RSD，％
                                                     B
                                                              0.200 7  0.197 5  0.399 9  100.85
                                                     C        0.199 2  0.197 5  0.399 8  101.57
             0  2.5  5  7.5  10  12.5 15  17.5 20  22.5 25  27.5  0.199 7  0.197 5  0.400 9  101.89  101.3  0.99
                              t，min                           0.200 6  0.197 5  0.401 8  101.90
           注：A.供试品溶液；B.阴性样品溶液B；C.黄芪甲苷对照品溶液                    0.199 2  0.197 5  0.395 2  99.22
           Note：A. test solution；B. negative sample solution B；C. astragalus  0.199 8  0.197 5  0.401 5  102.13
        control solution                                   2.4 圣愈汤冻干粉中4个成分的含量测定
              图2 黄芪甲苷含量测定高效液相色谱图                           2.4.1  阿魏酸、毛蕊花糖苷和藁本内酯的含量测定                    取
        Fig 2 HPLC chromatogram of content determination   3 批冻干粉样品适量，按“2.2.2”项下方法制备成供试品
              of astragaloside
                                                           溶液，按“2.2.1”项下色谱条件进样测定，按外标法计算
        2.3.4  线性关系考察        分别精密吸取“2.3.2”项下对照             阿魏酸、毛蕊花糖苷和藁本内酯的含量。每批样品平行
        品贮备液0.1、0.2、0.4、0.7、1 mL，置于不同5 mL量瓶中，              2份测定。结果，不同批次阿魏酸、毛蕊花糖苷和藁本内
        加甲醇制成6个不同浓度的对照品溶液。按“2.3.1”项色                       酯含量的均一性较好，详见表5。
        谱条件进样测定，以黄芪甲苷进样量的对数为横坐标                            2.4.2  黄芪甲苷含量测定          取 3 批冻干粉，按“2.3.2”项
       （x）、峰面积的对数为纵坐标（y）绘制标准曲线，计算回                         下方法制备供试品溶液，每批平行2份，按“2.3.1”项下色
        归方程。结果，黄芪甲苷在进样量范围内线性关系良                            谱条件进样，测定黄芪甲苷的含量。结果，不同批次黄


        中国药房    2020年第31卷第5期                                               China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 5  ·579  ·
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