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缩、萃取、脱色、结晶、过滤、洗涤、干燥等一系列过程制                          2.1.1 正相-紫外检测器色谱系统检查有关物质
        得 [11-12]  。非达霉素为台勾霉素 B 族的 1 种，其同系物多                   （1）色谱条件。色谱柱：ZORBAX Eclipse XDB-CN
        且结构极其相似       [13-15] 。在非达霉素发酵产生过程中通过              （250 mm×4.6 mm，5 µm）；流动相：正己烷-乙醇-乙腈
        生产控制发现，随着目标产物的增长，一些次级代谢产                           （84 ∶ 13 ∶ 3，V/V/V，含 0.1％醋酸和 0.05％三乙胺）；流速：
        物[如杂质 A、B、C、D、E、F、G、H、I、FR1、FR2 等（各杂质               1.5 mL/min；柱温：35 ℃；检测波长：245 nm；进样量：20
        结构经核磁共振、液质联用确定，具体过程本文略，下                            µL。
        同）]也会逐渐产生。这些次级代谢产物会降低目标产                               （2）供试品溶液的制备。精密称取非达霉素粗品适
        物的纯度，导致药品质量下降，再则这些杂质的毒理药                            量，加溶剂[乙醇-乙腈（5 ∶ 1，V/V）]溶解后，用正己烷定容
        理作用不明确，也可能影响临床药品的安全性、有效                             并稀释制成每1 mL中约含2 mg非达霉素的溶液，即得。
        性。目前未见相关文献对非达霉素原料药在发酵产生                                （3）非达霉素粗品分析。取“2.1.1（2）”项下非达霉
        过程中可能产生的杂质进行全面监控的报道。为了更                             素粗品供试品溶液，按“2.1.1（1）”项下色谱条件进样分
        好地控制非达霉素原料药质量，保证用药的安全性和有                            析，记录色谱图，详见图2。
        效性，笔者依据文献方法 ，对比研究了非达霉素原料                                                   F
                              [16]
                                                               175 000             杂质C、
        药中主要杂质在正相-紫外检测器色谱系统、反相-蒸发                              150 000
                                                               125 000
        光散射检测器色谱系统、反相-紫外检测器色谱系统下                              U，V  μ  100 000
                                                                75 000
        的分离情况，建立以高效液相色谱（HPLC）法检查非达                              50 000          非达霉素  杂质E
                                                                25 000
                                                                  0
        霉素原料药中有关物质的方法，并采用不加校正因子的                               -25 000
        主成分自身对照法计算杂质含量，为控制非达霉素原料                                   0   10  20  30  40  50  60  70  80  90
                                                                                    t，min
        药的质量提供参考。非达霉素的化学结构式见图1。
                                                            图 2  非达霉素粗品在正相-紫外检测器色谱系统中的
                                                                 色谱图
                                                            Fig 2  NP-HPLC-UV chromatogram of fidaxomicin
                                                                   crude products
                                                                由图 2 可见，在本色谱条件下，色谱系统基线噪音
                                                            大、信噪比高，杂质C与杂质F保留时间相同，分离较差；
                                                            另外，还有部分含量在0.1％以下的杂质峰与噪音相当，
                                                            不能检测出来。因此，正相-紫外检测器色谱系统不适
                     图1   非达霉素化学结构式                         用于非达霉素有关物质的检查。
              Fig 1 Chemical structure of fidaxomicin       2.1.2 反相-蒸发光散射检测器色谱系统检查有关物质

        1 材料                                                   （1）色谱条件。色谱柱：Agilent Eclipse XDB C18
        1.1  仪器                                            （250 mm×4.6 mm，5 µm）；流动相：A 相为 0.05％冰醋酸
            2695 型 HPLC 仪、2489 型紫外检测器（美国 Waters             缓冲液（用氨水调节 pH 至 3.8）-乙腈（90 ∶ 10，V/V），B 相
        公司）；2000ES 型蒸发光散射检测器（美国 Alltech 公                   为水-乙腈（10 ∶ 90，V/V），梯度洗脱；流速：1.0 mL/min；柱
        司）；2010-CHT型HPLC仪（日本岛津公司）。                          温：35 ℃；进样量：20 µL；蒸发光散射检测器漂移管温
        1.2  药品与试剂                                          度：110 ℃；气体流速：3.0 L/min。梯度洗脱程序见表1。
            非达霉素粗品（批号：20160601，纯度：90.2％）、非达                 表 1   反相-蒸发光散射检测器色谱系统的梯度洗脱
        霉素精粉（批号：20160801、20160802、20160803，纯度分                    程序
        别为：98.6％、98.8％、98.5％）、非达霉素对照品（批号：                   Tab 1 Gradient elution procedure of RP-HPLC-ELSD
        201510，纯度：98.8％）、非达霉素杂质 C（批号：201607，                时间，min           流动相A，％              流动相B，％
                                                            0                  55                   45
        纯度：98.6％）均由华北制药集团新药研究开发有限责任                         8                  55                   45
        公司提供；乙腈、正己烷、乙醇均为色谱纯，其他试剂均                           45                 34                   66
        为国产分析纯，水为自制蒸馏水。                                     53                  0                  100
                                                            60                  0                  100
        2 方法与结果                                             61                 55                   45
        2.1  色谱系统及检测器的选择                                    70                 55                   45
            先后选用正相-紫外检测器色谱系统、反相-蒸发光                            （2）供试品溶液的制备。精密称取非达霉素粗品适
        散射检测器色谱系统、反相-紫外检测器色谱系统对非                            量，用乙腈定容并稀释制成每 1 mL 中约含 5 mg 非达霉
        达霉素粗品进行分析，建立色谱条件。                                   素的溶液，即得。


        ·582  ·  China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 5                                   中国药房    2020年第31卷第5期
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