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非达霉素原料药中有关物质的检查方法研究 Δ

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王娅莉 ，刘 月，班 璐，李晓露，程晓昆，任风芝，张雪霞（华北制药集团新药研究开发有限责任公司/微生物
药物国家工程研究中心/河北省工业微生物代谢工程技术研究中心，石家庄 050015）

中图分类号 R927.2 文献标志码 A 文章编号 1001-0408（2020）05-0581-05
DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2020.05.15

摘 要 目的：建立非达霉素原料药中有关物质的检查方法。方法：分别考察正相-紫外检测器色谱系统、反相-蒸发光散射检测
器色谱系统、反相-紫外检测器色谱系统对非达霉素原料药中有关物质的检出能力，优选出最佳色谱系统。建立有关物质检查的
高效液相色谱法，色谱柱为Agilent Eclipse XDB C18，流动相A为0.2％三乙胺缓冲液（pH 3.8）-乙腈（55∶45，V/V）、流动相B为0.2％
三乙胺缓冲液（pH 3.8）-乙腈（20∶80，V/V）（梯度洗脱），流速为1.0 mL/min，检测波长为230 nm，柱温为35 ℃，进样量为10 µL；以不
加校正因子的主成分自身对照法计算有关物质含量。结果：非达霉素在正相-紫外检测器色谱系统下不能有效分离杂质C、F，在
反相-蒸发光散射检测器色谱系统下仅能检出杂质C、D、E、F 4个杂质；在反相-紫外检测器色谱系统下可检出11个杂质，故以此系
统进行有关物质检查。在方法学考察中，非达霉素检测质量浓度线性范围为0.5～20.0 μg/mL（R ＝0.999 9）；检测限为0.05 ng，定
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量限为0.15 ng；重复性、中间精密度试验的RSD均小于2.0％（n＝6）；平均回收率为98.4％（RSD为3.6％，n＝9）。3批非达霉素原
料药中杂质含量分别为0.53％、0.51％、0.51％。结论：非达霉素在反相-紫外检测器色谱系统下进行杂质检查效果最好；建立的有
关物质检查方法专属性强、灵敏度高，可用于非达霉素原料药中有关物质的检查。
关键词 非达霉素；高效液相色谱法；正相色谱；反相色谱；紫外检测器；蒸发光散射检测器；主成分自身对照法；有关物质

Study on Detection Methods for Related Substances in Fidaxomicin Raw Material
WANG Yali，LIU Yue，BAN Lu，LI Xiaolu，CHENG Xiaokun，REN Fengzhi，ZHANG Xuexia（New Drug
Research & Development Company of NCPC/National Engineering Research Center of Microbial Medicine/
Hebei Industry Microbial Metabolic Engineering &Technology Research Center，Shijiazhuang 050015，China）

ABSTRACT OBJECTIVE：To establish the method for the determination of related substances in fidaxomicin raw material.
METHODS：The detection ability of NP-HPLC-UV，RP-HPLC-ELSD and RP-HPLC-UV systems for the related substances in
fidamycin raw material was investigated and the best chromatographic system was selected. The HPLC detection method for the
related substances was established. The detection was performed on Agilent Eclipse XDB C18 column with mobile phase A consisted
of 0.2％ triethylamine buffer solution（pH 3.8）-acetonitrile（55 ∶ 45，V/V），mobile phase B consisted of 0.2％ triethylamine buffer
solution（pH 3.8）-acetonitrile（20 ∶ 80，V/V）at the flow rate of 1.0 mL/min（gradient elution）；the detection wavelength was set at
230 nm，and column temperature was 35 ℃；the sample size was 10 µL. Calculation of the content of related substances was
principal component self-control method without correction factor. RESULTS：The impurities C and F could not be separated
effectively in NP-HPLC-UV system. In RP-HPLC-ELSD system， only impurities C， D， E and F could be detected. In
RP-HPLC-UV system，11 impurities could be detected. In the study of methodology，the linear ranges were 0.5-20.0 μg/mL for
fidaxomicin（R ＝0.999 9）；the LOD was 0.05 ng，LOQ was 0.15 ng；RSDs of reproducibility and intermediate precision tests
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were less than 2.0％（n＝6）；average recovery was 98.4％（RSD＝3.6％ ，n＝9）. The sum of impurities in 3 batches of raw
materials were 0.53％，0.51％，0.51％，respectively. CONCLUSIONS：The effect of detecting impurities by RP-HPLC-UV are the
best. Established method is specific and sensitive，and can be used for the determination of related substance in fidaxomicin raw
material.
KEYWORDS Fidaxomicin；HPLC；Normal phase chromatogram；Reverse phase chromatogram；UV detector；ELSD；Principal
component self-control method；Related substance

非达霉素（Fidaxomicin）又名非达米星，最早于1975 素，分子式为 C52H74Cl2O18，分子量为 1 058.04，对革兰氏
年发现，是一种具有18元环复杂结构的大环内酯类抗生 阳性需氧及厌氧菌均具有较好的抗菌作用 [1-4] 。2011
Δ 基金项目：国家科技重大专项项目（No.2019ZX09302006） 年被美国食品药品监督管理局（FDA）批准用于治疗艰
＊高级工程师，硕士。研究方向：药物分析及质量控制。电话： 难梭菌感染（CDI），且治疗 CDI 的效果优于现在临床常
0311-88152247。E-mail：kittyvic@sina.com [5-10]
用的万古霉素 。
# 通信作者：研究员级正高级工程师，硕士。研究方向：天然药
物与微生物药物研发。电话：0311-88152297。E-mail：zhangxuexi- 非达霉素为微生物的次级代谢产物，非达霉素粗品
azxx@163.com 可由游动放线菌属菌株发酵产生，通过过滤、浸泡、浓

中国药房 2020年第31卷第5期 China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 5 ·581 ·