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（3）非达霉素粗品分析。取“2.1.2（2）”项下非达霉 0.09
0.08 杂质C 非达霉素
素粗品供试品溶液适量，按“2.1.2（1）”项下色谱条件进 0.07
0.06
0.05 杂质H
样分析，记录色谱图，详见图3。 AU 0.04 杂质F
0.03 杂质B 杂质D 杂质E 杂质G
240 0.02 杂质A 杂质FR1 杂质FR2
220 非达霉素 0.01 杂质I
200 0
180 －0.01
mV 160 杂质C 0 4 8 12 16 20 24 28 32 36 40 44 48 52 56 60 64 68
140
U， 120 t，min
100 杂质D 杂质E 杂质F
80 图 4 非达霉素粗品在反相-紫外检测器色谱系统中的
60
40 色谱图
0 4 8 12 16 20 24 28 32 36 40 44 48 52 56 60
t，min
Fig 4 RP-HPLC-UV chromatogram of fidaxomicin
图 3 非达霉素粗品在反相-蒸发光散射检测器色谱系 crude products
统中的色谱图
（1）系统适用性溶液。分别取非达霉素对照品及杂
Fig 3 RP-HPLC-ELSD chromatogram of fidaxomi-
质C（用于考察其与主峰的分离情况）适量，用乙腈溶解
cin crude products
稀释制成质量浓度均约为 2.5 μg/mL 的混合溶液，作为
由图3可见，非达霉素粗品在反相-蒸发光散射检测
系统适用性溶液。
器色谱系统中仅能检出杂质C、D、E、F，其它杂质不能有
（2）供试品溶液。取非达霉素精粉适量，精密称定，
效检出。因此，反相-蒸发光散射检测器色谱系统不适
加乙腈溶解并稀释制成每1 mL中约含0.5 mg非达霉素
用于非达霉素有关物质的检查。
的溶液。
2.1.3 反相-紫外检测器色谱系统检查有关物质
（3）对照溶液。精密量取“2.2.1（2）项下”供试品溶
（1）色谱条件。色谱柱：Agilent Eclipse XDB C18
液 1.0 mL，置于 200 mL 量瓶中，用乙腈稀释至刻度，摇
（250 mm×4.6 mm，5 µm）；流动相：A 相为 2‰三乙胺缓
匀，作为对照溶液。
冲液（用磷酸调节 pH 至 3.8）-乙腈（55 ∶ 45，V/V），B 相为
2.2.2 专属性试验
0.2％三乙胺缓冲液（用磷酸调节 pH 至 3.8）-乙腈（20 ∶
（1）酸破坏样品溶液。取非达霉素精粉（批号：
80，V/V），梯度洗脱；流速：1.0 mL/min；检测波长：230
20160801，下同）25 mg，置于 50 mL 量瓶中，加 1 mol/L
nm；柱温：35 ℃；进样量：10 µL。梯度洗脱程序见表2。
盐酸溶液 5 mL，放置 15 min 后，加 1 mol/L 氢氧化钠溶
表2 反相-紫外检测器色谱系统的梯度洗脱程序
液5 mL中和，再加乙腈溶解，定容，摇匀，即得。
Tab 2 Gradient elution procedure of RP-HPLC-UV
（2）碱破坏样品溶液。取非达霉素精粉25 mg，置于
时间，min 流动相A，％ 流动相B，％
0 100 0 50 mL 量瓶中，加 0.01 mol/L 氢氧化钠溶液 1 mL，放置
15 100 0 15 min 后，加 0.01 mol/L 盐酸溶液 1 mL 中和，再加乙腈
42 54 46
53 0 100 溶解，定容，摇匀，即得。
60 0 100 （3）高温破坏样品溶液。取非达霉素精粉适量，置
61 100 0 于干燥坩锅中，放酒精灯上（外焰温度 400～500 ℃）翻
70 100 0
炒1 min左右，至颜色变淡黄后取出放冷，取25 mg，置于
（2）供试品溶液的制备。精密称取非达霉素粗品适
50 mL量瓶中，加乙腈溶解，定容，摇匀，即得。
量，用乙腈定容并稀释制成每 1 mL 中约含 0.5 mg 非达
（4）氧化破坏样品溶液。取非达霉素精粉25 mg，置
霉素的溶液，即得。
于50 mL量瓶中，加30％过氧化氢溶液3 mL，于95 ℃水
（3）非达霉素粗品分析。取“2.1.3（3）”项下非达霉
素粗品供试品溶液适量，按“2.1.3（1）”项下色谱条件进 浴放置40 min，放冷，加乙腈溶解，定容，摇匀，即得。
样分析，记录色谱图，详见图4。 （5）光照破坏样品溶液。取非达霉素精粉适量，置
由图4可见，非达霉素粗品在反相-紫外检测器色谱 于强光照射试验箱[（4 500±500）lx]照射 10 d 后，取出
系统下，可检出非达霉素杂质 A、B、C、D、E、F、G、H、I、 放冷，取 25 mg，置于 50 mL 量瓶中，加乙腈溶解，定容，
FR1、FR2 共计 11 个杂质，与前 2 种色谱系统比较，该色 摇匀，即得。
谱系统不仅检出杂质个数更多，而且杂质分离效果更 取“2.2.1（2）”项下供试品溶液和“2.2.2（1）～（5）”项
好、灵敏度更高。因此，本研究选择反相-紫外检测器色 下酸破坏、碱破坏、高温破坏、氧化破坏、光照破坏样品
谱系统对非达霉素有关物质进行检查。 溶液各 10 μL，按“2.1.3（1）”项下色谱条件进样测定，记
2.2 有关物质检查方法的建立 录色谱图。结果，非达霉素精粉在各破坏条件下均有不
2.2.1 溶液的制备 同程度的降解，降解产物与主峰以及杂质峰间均能达到

中国药房 2020年第31卷第5期 China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 5 ·583 ·