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基线分离，提示本方法的专属性较强。6 种溶液的色谱 2.2.3 检测限与定量限考察
图见图5（注：图中RRT表示未知降解产物峰以主峰为基 将非达霉素精粉供试品溶液用乙腈适当稀释后，按
准的相对保留时间）。 “2.1.3（1）”项下色谱条件连续进样6次，记录峰面积。当
信噪比为 3 ∶ 1 时得检测限；当信噪比为 10 ∶ 1 时得定量
70 非达霉素
60 限。结果，非达霉素的检测限为 0.05 ng，定量限为 0.15
50 ng。
40
mAU 30 2.2.4 线性关系考察
20
10 杂质C 取非达霉素对照品约50 mg，置于50 mL量瓶中，加
0
－10 乙腈溶解定容，然后逐级稀释为 0.5、0.8、1.0、1.5、5.0、
5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 70
t，min 10.0、20.0 μg/mL的溶液，振荡摇匀，按“2.1.3（1）”项下色
A.供试品溶液
谱条件进样测定，记录色谱图。以非达霉素质量浓度
70 非达霉素 （x，μg/mL）为横坐标、峰面积（y）为纵坐标进行回归分
60
50 析。结果，非达霉素回归方程为 y＝25 258.015 9x+
40 RRT＝0.69 杂质FR1 杂质FR2
mAU 30 RRT＝0.66 238.201 9（R ＝0.999 9），检测质量浓度线性范围为0.5～
2
20
10 杂质C 20.0 μg/mL。
0
－10 2.2.5 重复性试验
0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 70
t，min 精密称取非达霉素精粉约25 mg，平行称定6份，按
B.酸破坏样品溶液
“2.2.1（2）”项下方法制备供试品溶液，按“2.1.3（1）”项下
70 杂质D 非达霉素 色谱条件进样测定，记录峰面积，代入回归方程计算含
60 RRT＝0.92
50 量。结果，非达霉素含量的RSD为1.8％（n＝6），表明该
40
mAU 30 杂质N4 方法重复性良好。
20
10 杂质C 2.2.6 中间精密度试验
0
－10 由不同分析人员使用不同仪器，按“2.1.3（1）”项下
0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 70
t，min 色谱条件连续进样测定同一供试品溶液6次，记录峰面
C.碱破坏样品溶液
积，代入回归方程计算含量。结果，非达霉素含量的
70 非达霉素
60 杂质FR2 RSD为3.1％（n＝6），表明该方法中间精密度良好。
50
40 2.2.7 回收率试验
mAU 30 RRT＝0.66 RRT＝0.69 杂质B2
20 精密称取非达霉素对照品9份，各约25 mg，置于50
10 杂质C
0 mL 量瓶中，用乙腈溶解并稀释至刻度，振荡摇匀，再分
－10
0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 70 别稀释成0.1％、0.2％、0.3％浓度（非达霉素原料药的杂
t，min
D.高温破坏样品溶液 质限度是 0.5％，但多批样品检测的杂质限度均在 0.2％
70 左右，故以0.2％作为中间浓度）的溶液各3份，作为供试
60 非达霉素 品溶液。按“2.1.3（1）”项下色谱条件进样，记录色谱图，
50
40 RRT＝0.80 RRT＝0.81 按外标法以峰面积计算回收率，结果见表3。
mAU 30
20 表3 回收率试验结果（n＝9）
10 杂质C 杂质E 杂质FR2
0 Tab 3 Results of recovery tests（n＝9）
－10
0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 70 溶液浓度，％ 加入量，ng 测得量，ng 回收率，％ 平均回收率，％ RSD，％
t，min
E.氧化破坏样品溶液 0.1 4.822 4.468 91.5
5.022 4.805 95.7
17.5 非达霉素 5.112 5.122 100.2
15.0
12.5 0.2 9.764 9.972 102.1
10.0 10.04 9.865 98.2 98.4 3.6
mAU 7.5 杂质C
5.5
2.5 杂质G 10.22 9.946 97.3
0 0.3 14.65 15.15 103.4
－2.5
－5.0 15.07 15.03 99.8
0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 70 15.34 14.87 96.9
t，min
F.光照破坏样品溶液 2.2.8 非达霉素有关物质检查
图5 专属性试验高效液相色谱图 取非达霉素精粉 3 批，按“2.2.1（2）”“2.2.1（3）”项下
Fig 5 HPLC chromatograms of specific test 方法制备供试品溶液和对照溶液，按“2.1.3（1）”项下色

·584 · China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 5 中国药房 2020年第31卷第5期