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和千金子素 L1、L2、L3、L8单体化合物置于圆底烧瓶中，加 2.3 肠灌流液中4种千金子素的含量测定
乙酸乙酯适量使溶解，水浴旋转蒸发并真空干燥除去有 2.3.1 混合对照品溶液的制备 取千金子素 L1、L2、L3、
机溶剂，制成脂膜；加入4.96 g/L脱氧胆酸钠溶液[以pH L8单体化合物各适量，精密称定，置同一 5 mL 量瓶中，
7.4 的磷酸盐缓冲液（PBS）为溶剂制备]适量，水浴下超 加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，得质量浓度分别为
声处理；离心，以 0.22 μm 微孔滤膜滤过，即得澄清透明 544、530、556、568 mg/L的混合对照品溶液。
的胶束溶液。在制备过程中，4 种千金子素均过量加入 2.3.2 供试品溶液的制备 “2.2”项下灌流实验结束后，
（40 mg/L），在离心、膜滤过环节均可除去未被胶束增溶 取各灌流液小瓶和收集液小瓶中的液体置于分液漏斗
的游离千金子素。按照千金子脂肪油的不同用量（脂肪 中，以乙酸乙酯提取3次，每次10 mL；合并提取液，水浴
油在自组装胶束溶液中质量浓度分别为 0、0.2、0.4、1、4 蒸干，残渣以甲醇溶解并定容至2 mL量瓶中，摇匀，即得。
g/L ），将所制备的自组装胶束溶液依次作为不同千金 2.3.3 空白溶液的制备 按“2.2”项下方法建立大鼠在
[12]
子脂肪油用量组的含药肠灌流液。 体单向灌流模型，以K-R缓冲液代替含药肠灌流液进行
2.2 在体单向肠灌流实验 灌流实验，收集流出液作为空白肠灌流液，按“2.3.2”项
大鼠禁食不禁饮 18 h 后，腹腔注射 10％水合氯醛 下方法制备空白溶液。
（3 mL/kg）麻醉，背位固定于手术台上，从腹中线剑突下 2.3.4 色谱条件 色谱柱：Inertsil ODS-3（250 mm×4.6
2 cm打开腹腔，分离不同部位肠段，即十二指肠段（自幽 mm，5 μm）；柱温：25 ℃；流动相：甲醇-水（82 ∶ 18，V/V）；
流速：1.0 mL/min；检测波长：275 nm；进样量：20 μL。
门上行 1 cm 处起往下 10 cm 止）、空肠段（自幽门上行
[12]
15 cm起往下10 cm止）、回肠段（自盲肠上行20 cm起往 2.3.5 含量测定方法学考察 参照前期研究 进行4种
千金子素含量测定的方法学考察。取“2.3.1”～“2.3.3”
下 10 cm 止）、结肠段（自盲肠下行 1 cm 起往下 10 cm
项下混合对照品溶液、供试品溶液（0.2 g/L 脂肪油组第
止）。在各部位肠段的两端处各剪一个 V 型小口，将硅
20 min 取样液）和空白溶液，按“2.3.4”项下色谱条件进
胶管小心插入并结扎（注意避免伤及血管），将其摆至合
样，记录色谱图，见图 2。结果，空白肠灌流液不干扰 4
适形状使灌流液能流通顺畅为宜，然后用浸有生理盐水
种千金子素成分的测定（图2）；千金子素L1、L2、L3、L8检
的脱脂棉覆盖伤口保湿，同时以红外灯保温，进行灌流
测质量浓度的线性范围分别为 1.088～87.04 mg/L（r＝
实验。
0.999 7）、1.06～84.8 mg/L（r＝0.999 8）、1.112～88.96
取大鼠 60 只，按“2.1”项下不同千金子脂肪油用量
mg/L（r＝0.999 7）、1.136～90.88 mg/L（r＝0.999 7）；精
的含药自组装胶束肠灌流液分为 5 组，每组 12 只大鼠，
密度、稳定性、重复性试验的RSD均小于3％（n＝6）；加
每 2 只大鼠作为一个小组，每一小组分别测定其中 2 个
样回收率分别为（101.27±2.15）％、（98.70±1.81）％、
肠段，将小组测定数据合并为一组完整的4个肠段测定
（97.77±1.34）％、（102.38±1.58）％，RSD 均小于 2.5％
数据（n＝6）。用37 ℃预热的生理盐水从大鼠肠段上端
（n＝6）。
开口轻缓冲洗肠道（方向勿反），直至将肠内容物冲洗干
375
净，再通空气排净生理盐水，接着用37 ℃预热的K-R缓 250 1
mV 2 3
冲液进行在体单向灌流（灌流方向同肠道内容物冲洗方 U， 125 4
0
向一致），以建立灌流体系；然后将“2.1.2”项下不同组别 0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 17.5 20.0 22.5 25.0
t，min
的含药肠灌流液以 1 mL/min 的速度灌流 2 min，使其充 A.混合对照品溶液
满肠段，再以 0.2 mL/min 平衡约 45 min。平衡结束后， 200
mV 150
100
在每段肠段的进口处放置已称定质量的小瓶（装有 10 U， 50 1 2 3 4
0
mL含药肠灌流液）用以进液，出口处放置已称定质量的
0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 17.5 20.0 22.5 25.0
小瓶用以收集流出液。在进口处硅胶管插入灌流液小 t，min
B.供试品溶液（0.2 g/L脂肪油组第20 min取样液）
瓶的同时，将出口处的硅胶管插入收集液小瓶。保持 5.0
mV 2.5
0.2 mL/min的流速不变，从出口端硅胶管流出第一滴液 U， 0
0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 17.5 20.0 22.5 25.0
体时开始计时，每隔20 min迅速更换下一组进出口处的 t，min
小瓶，共持续收集120 min。待流出液放冷至室温后，称 C.空白溶液
注：1.千金子素L8；2.千金子素L1；3.千金子素L3；4.千金子素L2
量各灌流液小瓶和流出液小瓶的质量，并计算灌入和流
Note：1. euphorbia L8；2. euphorbia L1；3. euphorbia L3；4. euphor-
出的肠灌流液质量。实验结束后，将相应实验肠段剪
bia L2
下，沿肠管剪开，平铺于坐标纸上，测量小肠内径与 图2 高效液相色谱图
长度。 Fig 2 HPLC chromatograms

中国药房 2020年第31卷第4期 China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 4 ·437 ·