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甲醇逐级稀释 2、4、8、16、32 倍，得系列线性关系工作溶 表9 加样回收率试验结果（n＝6）
液，按“2.4.2”项下色谱条件进样测定，记录峰面积。以 Tab 9 Results of recovery tests（n＝6）
各待测成分质量浓度（x，µg/L）为横坐标、峰面积（y）为 待测成分 已知含量， 加入量， 测得量， 加样回收率， 平均加样回收率， RSD，
mg mg mg ％ ％ ％
纵坐标进行线性回归，结果见表8。 大豆苷 0.188 6 0.212 4 0.390 7 95.15 95.72 0.51
表8 回归方程、线性范围以及定量限、检测限 0.189 1 0.212 4 0.391 8 95.43
0.189 5 0.212 4 0.392 7 95.67
Tab 8 Regression equation，linear range and limits of
0.190 2 0.212 4 0.394 0 95.95
quantification and detection 0.189 3 0.212 4 0.392 2 95.53
0.191 3 0.212 4 0.396 4 96.56
待测成分 回归方程 r 线性范围，μg/mL 定量限，μg/mL 检测限，μg/mL
黄豆黄苷 0.040 2 0.040 6 0.081 3 101.23 101.03 1.88
大豆苷 y＝42.073x+0.716 5 0.999 9 5.97～191.00 0.881 1 0.264 3
黄豆黄苷 y＝38.418x+0.092 0.999 9 1.05～33.46 0.611 6 0.244 7 0.040 7 0.040 6 0.082 2 102.22
染料木苷 y＝51.33x+45.864 0.999 5 8.93～285.61 0.078 6 0.021 4 0.040 5 0.040 6 0.081 8 101.72
0.039 4 0.040 6 0.079 6 99.01
大豆苷元 y＝57.479x－0.683 1 0.999 9 0.82～26.33 0.243 3 0.124 8
染料木素 y＝69.605x+1.142 3 0.999 7 0.93～29.64 0.511 6 0.106 7 0.039 3 0.040 6 0.079 3 98.52
0.041 1 0.040 6 0.083 1 103.45
2.4.5 定量限与检测限考察 精密量取“2.4.4”项下大 染料木苷 0.315 4 0.330 7 0.630 8 95.37 96.87 0.95
豆苷、黄豆黄苷、大豆苷元、染料木素混合对照品溶液和 0.323 1 0.330 7 0.646 2 97.70
0.323 8 0.330 7 0.647 6 97.91
染料木苷单一对照品溶液适量，用 70％甲醇倍比稀释， 0.320 5 0.330 7 0.641 1 96.95
按“2.4.2”项下色谱条件进样测定，以信噪比 10 ∶ 1、3 ∶ 1 0.320 3 0.330 7 0.640 7 96.89
0.318 7 0.330 7 0.637 5 96.40
分别计算定量限、检测限，结果见表8。 大豆苷元 0.056 5 0.040 1 0.096 6 100.00 100.50 0.78
2.4.6 精密度试验 精密量取“2.4.4”项下大豆苷、黄豆 0.056 6 0.040 1 0.096 8 100.25
0.056 9 0.040 1 0.097 2 100.50
黄苷、大豆苷元、染料木素混合对照品溶液和染料木苷
0.057 4 0.040 1 0.098 3 102.00
单一对照品溶液适量，按“2.4.2”项下色谱条件连续进样 0.056 4 0.040 1 0.096 4 99.75
测定 6 次，记录峰面积。结果，大豆苷、黄豆黄苷、染料 0.056 7 0.040 1 0.097 0 100.50
染料木素 0.039 8 0.038 4 0.079 6 103.65 101.26 1.21
木苷、大豆苷元、染料木素峰面积的RSD分别为1.33％、 0.038 9 0.038 4 0.077 8 101.30
1.31％、1.33％、1.36％、1.34％（n＝6），表明仪器精密度 0.038 7 0.038 4 0.077 4 100.78
0.038 3 0.038 4 0.076 9 100.52
良好。 0.038 7 0.038 4 0.077 5 101.04
2.4.7 稳定性试验 取“2.4.1”项下供试品溶液（编号： 0.038 4 0.038 4 0.076 9 100.26
S8），分别于室温放置0、2、4、6、8、10、12 h时按“2.4.2”项 适量，按“2.4.1”项下方法制备供试品溶液，再参照
下色谱条件进样测定，记录峰面积。结果，大豆苷、黄豆 “2.4.2”项 下 色 谱 条 件 [ 调 整 流 动 相（B）不 同 含 酸 量
黄苷、染料木苷、大豆苷元、染料木素峰面积的RSD分别 （0.7％、0.12％、0.17％）、不同流速（0.9、1.0、1.1 mL/min）、
为 2.66％、2.47％、2.48％、2.90％、1.20％（n＝7），表明供 不同柱温（20、25、30 ℃）]进样测定，记录峰面积并按标
试品在室温下放置12 h内稳定性良好。 准曲线法计算样品中5个成分的含量，结果见表10。结
2.4.8 重复性试验 取黑豆药材样品粉末（编号：S8）共 果表明，该方法能够满足试验要求，耐用性良好。
6份，每份约1 g，按“2.4.1”项下方法制备供试品溶液，再 表10 耐用性试验结果
按“2.4.2”项下色谱条件进样测定，记录峰面积并按标准 Tab 10 Results of durability tests
曲线法计算样品中5种成分的含量。结果，大豆苷、黄豆 大豆苷 黄豆黄苷 染料木苷 大豆苷元 染料木素
黄苷、染料木苷、大豆苷元、染料木素的平均含量分别为 色谱条件 含量，RSD， 含量，RSD， 含量，RSD， 含量，RSD， 含量， RSD，
mg/g ％ mg/g ％ mg/g ％ mg/g ％ mg/g ％
0.212 4、0.040 6、0.330 7、0.040 1、0.038 4 mg/g，RSD 分
流动相B含酸量，％ 0.7 0.239 1.27 0.042 3.67 0.354 2.37 0.041 3.24 0.035 3.21
别为 0.67％、0.87％、0.78％、1.13％、1.82％（n＝6），表明 1.2 0.233 0.040 0.342 0.044 0.037
方法重复性良好。 1.7 0.236 0.043 0.358 0.042 0.037
流速，mL/min 0.9 0.223 2.64 0.042 1.40 0.340 2.31 0.042 3.76 0.036 4.28
2.4.9 加样回收率试验 精密称取已知含量的黑豆药材 1.0 0.233 0.041 0.342 0.041 0.034

样品粉末（编号：S8），共6份，每份约1 g，精密称定，加入 1.1 0.234 0.041 0.355 0.039 0.037
柱温，℃ 20. 0.234 0.43 0.042 1.36 0.341 0.45 0.042 2.44 0.037 4.07
适量“2.1.1”项下各单一对照品溶液，按“2.4.1”项下方法 25. 0.232 0.043 0.339 0.041 0.035
制备供试品溶液，再按“2.4.2”项下色谱条件进样测定， 30. 0.233 0.042 0.342 0.040 0.034
记录峰面积并计算加样回收率，结果见表9。 2.4.11 样品含量测定 取 12 批黑豆药材样品适量，按
2.4.10 耐用性试验 取黑豆药材样品粉末（编号：S8） “2.4.1”项下方法制备供试品溶液，再按“2.4.2”项下色谱

中国药房 2020年第31卷第4期 China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 4 ·433 ·