Page 59 - 2020年1月第31卷第2期

β-actin（1 ∶ 1 000）、P53（1 ∶ 2 000）、Caspase-3（1 ∶ 2 000）、 膜电位图见图3（图中，红色荧光表示线粒体跨膜电位较
PARP（1 ∶ 1 000）、Caspase-9（1 ∶ 2 000）、Bcl-2（1 ∶ 800）等 高，呈聚集状态；绿色荧光代表线粒体跨膜电位较低，呈
相应一抗，于 4 ℃下孵育过夜；以 TBST 缓冲液洗涤 6 离散状态）；线粒体跨膜电位检测结果见表2。
次，加入HPR标记二抗（1 ∶ 50 000），于37 ℃下摇床孵育 表1 各组细胞凋亡率检测结果（x±±s，n＝3，，％％）
2 h；以TBST缓冲液洗涤6次，ECL显色曝光，晾干胶片， Tab 1 Results of apoptotic rate of cells in each group
扫描。以β-actin为参比，采用 BandScan 5.0 软件分析目 （x±±s，n＝3，，％％）
标蛋白条带的相对灰度值，用以表示蛋白表达水平。 组别 早期凋亡细胞率 晚期凋亡细胞率 总凋亡率
空白组 1.22±0.50 1.60±0.30 2.81±0.74
2.5 统计学方法 伪士的宁低剂量组 15.23±0.60 ＊＊ 10.75±1.17 ＊＊ 25.97±1.73 ＊＊
采用SPSS 19.0 统计软件分析处理试验数据。计量 伪士的宁中剂量组 20.58±3.09 ＊＊ 21.20±1.02 ＊＊ 41.79±3.01 ＊＊
伪士的宁高剂量组 25.56±5.03 ＊＊ 39.20±5.76 ＊＊ 64.76±1.10 ＊＊
资料以 x±s 表示，组间比较采用单因素方差分析。以
＊＊
注：与空白组比较， P＜0.01
P＜0.05表示差异有统计学意义。
Note：vs. blank group， P＜0.01
＊＊
3 结果
10 7 10 7
3.1 伪士的宁对HT-29细胞凋亡的影响
10 6 红色 10 6 红色
流式细胞凋亡检测结果显示，与空白组比较，伪士
10 5 10 5
的宁低、中、高剂量组细胞的早期凋亡率、晚期凋亡率和 R-A 10 4 绿色 R-A 10 4 绿色
总凋亡率均显著升高（P＜0.01），且随着伪士的宁浓度
10 3 10 3
的升高，细胞总凋亡率也随之升高，表明伪士的宁对 10 2 10 2
10 2 10 3 10 4 10 5 10 6 10 7 10 2 10 3 10 4 10 5 10 6 10 7
HT-29细胞的促凋亡作用呈浓度依赖趋势。各组细胞流 G-A G-A
式细胞凋亡图见图 1（图中，右下象限为早期凋亡细胞 A.空白组 B.伪士的宁低剂量组
10 7 10 7
群，右上象限为晚期凋亡细胞群）；凋亡率测定结果见
10 6 红色 10 6 红色
表1。
10 5 10 5
10 6 10 6 R-A 绿色 R-A 绿色
10 4 10 4
10 5 10 5 10 3 10 3
10 2 10 2
PI-A 10 4 PI-A 10 4 10 2 10 3 10 4 10 5 10 6 10 7 10 2 10 3 10 4 10 5 10 6 10 7
G-A G-A
10 3 10 3 C.伪士的宁中剂量组 D.伪士的宁高剂量组
图3 各组细胞流式细胞跨膜电位图
10 2 10 2
10 2 10 3 10 4 10 5 10 6 10 7 10 2 10 3 10 4 10 5 10 6 10 7 Fig 3 Flow cytometry transmembrane potential of
FITC-A FITC-A
A.空白组 B.伪士的宁低剂量组 cells in each group
10 6 10 6
表 2 各组细胞线粒体跨膜电位检测结果（x±±s，n＝
10 5 10 5 3，％％）
Tab 2 Results of mitochondrial transmembrane po-
PI-A 10 4 PI-A 10 4
tential of cells in each group（x±±s，n＝3，％％）
10 3 10 3
组别 红色荧光细胞数占比 绿色荧光细胞数占比
空白组 95.60±0.83 4.40±0.83
10 2 10 2
10 2 10 3 10 4 10 5 10 6 10 7 10 2 10 3 10 4 10 5 10 6 10 7 伪士的宁低剂量组 69.33±1.53 ＊＊ 30.63±1.56 ＊＊
FITC-A FITC-A 伪士的宁中剂量组 54.58±2.55 ＊＊ 45.41±2.56 ＊＊
C.伪士的宁中剂量组 D.伪士的宁高剂量组
伪士的宁高剂量组 39.38±3.88 ＊＊ 60.59±3.91 ＊＊
图2 各组细胞流式细胞凋亡图
注：与空白组比较， P＜0.01
＊＊
Fig 2 Flow cytometry apoptosis of cells in each group
＊＊
Note：vs. blank group， P＜0.01
3.2 伪士的宁对HT-29细胞线粒体跨膜电位的影响 3.3 伪士的宁对HT-29细胞相关蛋白表达的影响
线粒体跨膜电位检测结果显示，与空白组比较，伪 Western blotting法检测结果显示，与空白组比较，伪
士的宁低、中、高剂量组细胞的线粒体跨膜电位显著降 士的宁中、高剂量组细胞中 P53、Caspase-3、Caspase-9、
低（P＜0.01），且随着伪士的宁浓度的升高，细胞线粒体 c-PARP 的蛋白表达水平均显著升高（P＜0.05 或 P＜
跨膜电位随之降低，表明伪士的宁对HT-29细胞跨膜电 0.01）；伪士的宁低、中、高剂量组细胞中 Bcl-2 蛋白表达
位的降低作用呈浓度依赖趋势。各组细胞流式细胞跨 水平均显著降低（P＜0.05或P＜0.01），结果见图4、表3。

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