Page 57 - 2020年1月第31卷第2期

伪士的宁对人结肠癌HT-29细胞凋亡的影响及其机制研究 Δ

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冯振宇 ，孟 霜 ，常剑敏 ，周晓荣 ，史 敏 ，赵建平 （1.山西省中西医结合医院/山西中医学院中西医结合医
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院中心实验室，太原 030013；2.山西中医药大学中药学院，太原 030024）
中图分类号 R285.5 文献标志码 A 文章编号 1001-0408（2020）02-0179-05
DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2020.02.10
摘 要 目的：探讨伪士的宁对人结肠癌HT-29细胞凋亡的影响及其机制。方法：取人结肠癌HT-29细胞，随机分为空白组和低、
中、高剂量伪士的宁组（125、250、500 μmol/L），加入不含药培养基或含相应浓度伪士的宁的培养基培养48 h。采用流式细胞仪检
测细胞凋亡情况和线粒体跨膜电位；采用 Western blotting 法检测细胞中 P53、Caspase-3、Caspase-9、兔源 DNA 修复酶（c-PARP）、
Bcl-2的蛋白表达水平。结果：与空白组比较，低、中、高剂量伪士的宁组细胞凋亡率显著升高，线粒体跨膜电位均显著降低（P＜
0.01），且均呈现浓度依赖趋势。中、高剂量伪士的宁组细胞中P53、Caspase-3、Caspase-9、c-PARP蛋白表达水平较空白组均显著升
高，低、中、高剂量伪士的宁组细胞中Bcl-2蛋白表达水平则显著降低（P＜0.05或P＜0.01）。结论：伪士的宁可能通过上调P53蛋
白、下调Bcl-2蛋白的表达，改变线粒体膜电位，然后激活Caspase-3、c-PARP、Caspase-9的表达，进而激活内源性线粒体通路，发挥
促进HT-29细胞凋亡的作用。
关键词 伪士的宁；结肠癌；HT-29细胞；凋亡；线粒体跨膜电位；机制；P53；Caspase-3；Caspase-9；兔源DNA修复酶；Bcl-2
Study on the Effect and Its Mechanism of Pseudostrychnine on Human Colon Cancer HT-29 Cells
FENG Zhenyu ，MENG Shuang ，CHANG Jianmin ，ZHOU Xiaorong ，SHI Min ，ZHAO Jianping（1. Central La-
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boratory，Shanxi Hospital of Integrated Traditional and Western Medicine，Taiyuan 030013，China；2. College
of TCM，Shanxi University of TCM，Taiyuan 030024，China）
ABSTRACT OBJECTIVE：To investigate the effects and its mechanism of pseudostrychnine on the apoptosis of human colon can-
cer HT-29 cells. METHODS：Human colon cancer HT-29 cells were randomly divided into blank group，pseudostrychnine
low-dose，medium-dose and high-dose groups（125，250，500 μmol/L）. They were cultured with culture medium without medicine
or relevant concentration of pseudostrychnine for 48 h. The cell apoptosis and mitochondrial transmembrane potential were detected
by flow cytometry. Western blotting assay was employed to detect the protein expression of P53，Caspase-3，Caspase-9，DNA re-
pair enzyme from rabbit（c-PARP）and Bcl-2. RESULTS：Compared with blank group，apoptotic rate of cells was increased signifi-
cantly in pseudostrychnine low-dose，medium-dose and high-dose groups，while mitochondrial transmembrane potential was de-
creased significantly（P＜0.01），in concentration-dependent manner. The protein expression levels of P53，Caspase-3，Caspase-9
and c-PARP were increased in pseudostrychnine medium-dose and high-dose groups，compared with blank group；while those of
Bcl-2 were decreased significantly in pseudostrychnine low-dose，medium-dose and high-dose groups（P＜0.05 or P＜0.01）. CON-
CLUSIONS：Pseudostrychnine may change mitochondrial membrane potential by up-regulating the protein expression of P53 and
down-regulating the protein expression of Bcl-2，and activate the expression of Caspase-3，c-PARP and Caspase-9，so as to acti-
vate endogenous mitochondrial pathway and promote the apoptosis of HT-29 cells.
KEYWORDS Pseudostrychnine；Colon cancer；HT-29 cells；Apoptosis；Mitochondrial transmembrane potential；Mechanism；
P53；Caspase-3；Caspase-9；c-PARP；Bcl-2

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结肠癌是一种常见的临床恶性肿瘤，目前我国结肠 痛、抗肿瘤和抗炎的功效 。近年来，马钱子活性成分的
癌发病率和病死率越来越高，在全部恶性肿瘤中位居第 抗肿瘤作用已成为研究的热点，相关研究表明，马钱子
5位，且确诊时大多数已发展至中晚期，严重威胁患者的 碱在肝癌、乳腺癌、血液系统肿瘤、基底样鳞状细胞癌、
身体健康和正常生活 。中医药辅助治疗结肠癌有助于 S180肉瘤等方面均表现出一定的抑制作用 。本课题组
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提高患者在治疗过程中的免疫力，减少放化疗带来的不 前期对马钱子进行了系统的提取、分离、纯化研究，获得
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良反应，降低复发率，改善预后 。马钱子具有抑菌、镇
马钱子碱、士的宁、伪士的宁等单体生物碱成分；进一步
Δ 基金项目：国家国际科技合作专项项目（No.2014DFA33150） 就上述单体生物碱类成分对结肠癌细胞的抑制作用进
＊副主任医师，硕士生导师，硕士。研究方向：经方治疗疑难病。
行了研究，结果发现伪士的宁对HT-29细胞的抑制作用
电话：0351-2150899。E-mail：sxfzy@163.com
较强（拟另文发表）。伪士的宁分子式为 C21H22N2O3，分
# 通信作者：主任药师，博士生导师，硕士。研究方向：中药药理
学。电话：0351-2150899。E-mail：mengzhaoshuang@126.com 子量为350（结构式见图1），其在人类结肠癌治疗中的应

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