Page 51 - 2020年1月第31卷第2期

百药煎HPLC指纹图谱的建立及其中5种成分的含量测定 Δ

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陈晶晶 ，张振凌 ，曹淼淼，张 颖，杨佳宁（河南中医药大学药学院，郑州 450008）
中图分类号 R284.1 文献标志码 A 文章编号 1001-0408（2020）02-0173-06
DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2020.02.09

摘 要 目的：建立百药煎的高效液相色谱（HPLC）指纹图谱，同时测定其中5种成分的含量及优选百药煎的原料酒糟。方法：采
用HPLC法，色谱柱为Waters Symmetry Shield TM RP18，流动相为乙腈-0.1％三氟乙酸水溶液（梯度洗脱），流速为0.8 mL/min，检测波
长为280 nm，柱温为30 ℃，进样量为5 μL。以没食子酸为参照，绘制14批百药煎样品的HPLC指纹图谱；采用《中药色谱指纹图谱
相似度评价系统》（2012版）进行相似度评价，确定共有峰；采用SPSS 20.0软件进行聚类分析。结果：14批百药煎样品共有11个共
有峰，相似度为0.424～0.998，其中A1～A5相似度＜0.850；B1～B9样品中为共指认出5个成分，分别为没食子酸、（－）-表没食子
儿茶素、没食子酸甲酯、2，4，6-三-O-没食子酰-β-D-葡萄糖、2，4，6-三-O-没食子酰-α-D-葡萄糖。聚类分析结果显示，14批样品可聚
为3类，A1～A5聚为一类，B1、B6聚为一类，B2～B5、B7～B9聚为一类。上述5种成分的质量浓度线性范围分别为29.96～599.2
μg/mL（r＝0.999 6）、0.832～416 μg/mL（r＝0.999 6）、0.102～51 μg/mL（r＝0.999 8）、0.286 4～143.2 μg/mL（r＝0.999 8）、0.286 4～
143.2 μg/mL（r＝0.999 8）；定量限分别为 0.060、0.104、0.017、0.029、0.057 μg/mL，检测限分别为 0.018、0.031、0.005、0.009、0.017
μg/mL；精密度、稳定性、重复性、耐用性试验的 RSD 均小于 3％；加样回收率分别为 97.16％～101.88％（RSD＝1.60％，n＝6）、
96.98％～99.24％（RSD＝0.85％，n＝6）、97.70％～101.64％（RSD＝1.54％，n＝6）、97.77％～103.08％（RSD＝1.82％，n＝6）、
98.16％～101.88％（RSD＝1.24％，n＝6）。结论：本研究所建HPLC指纹图谱和聚类分析可用于评价百药煎的质量；所建含量测定
方法操作简便，可用于同时测定百药煎中5种成分的含量；稻壳类酒糟不适用于发酵百药煎。
关键词 百药煎；指纹图谱；高效液相色谱法；含量测定；酒糟；聚类分析

Establishment of HPLC Fingerprint of Chinese Gall Leaven and Content Determination of 5 Components
CHEN Jingjing，ZHANG Zhenling，CAO Miaomiao，ZHANG Ying，YANG Jianing（College of Pharmacy，Henan
University of TCM，Zhengzhou 450008，China）

ABSTRACT OBJECTIVE：To establish HPLC fingerprint of Chinese gall leaven，simultaneous determination of 5 components
and optimization of distillers’grains. METHODS：HPLC method was adopted. The determination was carried out on Waters
Symmetry Shield TM RP18 column with mobile phase consisted of acetonitrile-0.1％ trifluoroacetic acid aqueous（gradient elution）at
the flow rate of 0.8 mL/min. The column temperature was 30 ℃，and detection wavelength was set at 280 nm. The sample size was
5 µL. Using gallic acid as reference，HPLC fingerprints of 14 batches of sample were drawn. The similarity evaluation was
performed by using Similarity Evaluation System of Chromatogram Fingerprint of TCM （2012 edition） to determine common
peaks；SPSS 20.0 software was used for cluster analysis. RESULTS：There were 11 common peaks in 14 batches of samples，and
the similarity range of 14 batches of samples was 0.424-0.998，A1-A5 was less than 0.850；5 components were identified in B1-B9
sample， i.e. gallic acid，（ － ）-epigallocatechin， methyl gallate， 2，4，6-tri-O-galloyl-α-D-glucose and 2，4，6-tri-O-galloyl-
β-D-glucose. The results of cluster analysis showed that 14 batches of samples could be grouped into 3 categories，i.e. A1-A5 into one
category，B1 and B6 into one category，B2-B5 and B7-B9 into one category. The linear ranges of above 5 components were
29.96-599.2 μg/mL（r＝0.999 6），0.832-416 μg/mL（r＝0.999 6），0.102-51 μg/mL（r＝0.999 8），0.286 4-143.2 μg/mL（r＝0.999 8），
0.286 4- 143.2 μg/mL（r＝0.999 8），respectively. The limits of quantitation were 0.060，0.104，0.017，0.029，0.057 μg/mL；the
limits of detection were 0.018，0.031，0.005，0.009，0.017 μg/mL，respectively. RSDs of precision，stability，reproducibility and
durability tests were all lower than 3％. The recoveries were 97.16％-101.88％（RSD＝1.60％，n＝6），96.98％-99.24％（RSD＝
0.85％，n＝6），97.7％-101.64％（RSD＝1.54％，n＝6），97.77％-103.08％（RSD＝1.82％，n＝6），98.16％-101.88％（RSD＝1.24％，
n＝6），respectively. CONCLUSIONS：The established HPLC fingerprint and cluster analysis can be used to evaluate the quality of
Chinese gall leaven. The established method is simple to
Δ 基金项目：国家重点研发计划项目（No.2018YFC1707200）；公
operate and can be used to determine the contents of 5
益性行业科研专项项目（No.201507004-03）；河南中医药大学研究生
components simultaneously；rice husk distillers’grains were
科研创新基金项目（No.YJS2018B14）
not suitable for fermented Chinese gall leaven.
＊硕士研究生。研究方向：中药饮片及新药研究。E-mail：
KEYWORDS Chinese gall leaven； Fingerprint； HPLC；
401327039@qq.com
# 通信作者：教授，博士生导师，博士。研究方向：中药饮片及新 Content determination；Distillers’grains；Cluster analysis
药研究。电话：0371-65680970。E-mail：zhangzl6758@163.com

中国药房 2020年第31卷第2期 China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 2 ·173 ·