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浓度与容量因子的变化符合溶质计量置换保留模型                             6.862（r＝1.000 0），钩藤碱和异钩藤碱的检测质量浓度
       （SDM-R），且保留过程以竞争吸附为主。                               线性范围分别为4.93～157.76、4.98～159.50 μg/mL。
        2.5 方法学考察                                          2.5.3  定量限与检测限考察           精密量取“2.2”项下钩藤
        2.5.1  系统适用性试验         取安义县钩藤药材粉末样品                碱对照品贮备液适量和异钩藤碱对照品贮备液适量，分
       （批号：181206）1 份，按“2.3”项下方法制备成供试品溶                    别倍比稀释，按“2.1”项下色谱条件进行测定，以信噪比
        液；取“2.2”项下混合对照品溶液及空白溶液（60％甲                        10∶1、3∶1分别计算定量限和检测限。结果，钩藤碱和异
        醇）。将 3 种溶液按“2.1”项下色谱条件（流动相中加入                      钩藤碱定量限分别为 0.486 4 、0.793 6 μg/mL，检测限分
        3.0 mmol/L C4mimCl）进样，记录色谱图。结果，混合对                 别为0.147 4 、0.240 5 μg/mL。
        照品溶液与供试品溶液中钩藤碱和异钩藤碱与各自前                            2.5.4  精密度试验       精密吸取“2.2”项下的混合对照品
        后峰均达到基线分离，分离度均大于1.5，理论板数以异                         溶液10 μL，注入液相色谱仪，连续进样6次，记录色谱峰
        钩藤碱计不低于50 000，保留时间为16.35 min。色谱图                   峰面积，结果钩藤碱和异钩藤碱峰面积的 RSD 均为
        见图4。                                               1.3％（n＝6），表明仪器精密度良好。
                50                                         2.5.5  重复性试验       取安义县钩藤样品（批号：181206）
                40                                         粉末 6 份，分别按“2.3”项下方法制备供试品溶液，测定
              mAU  30                                      其含量，结果钩藤碱和异钩藤碱含量的 RSD 分别为
                20
                                                           2.7％和3.1％（n＝6）。结果表明，本法重复性良好。
                10                                         2.5.6  稳定性考察       取“2.3”项下安义县钩藤样品（批
                0                                          号：181206）供试品溶液 1 份，分别于 0 、1、2 、4 、8 、12 h
                  0    5   10   15   20   25   30
                                t，min                      时进样 10 μL 测定，结果钩藤碱和异钩藤碱峰面积的
                              A.空白溶液
                                                           RSD 分别为 1.3％和 1.8％（n＝6），结果表明，供试品溶
               300              异钩藤碱
               250                                         液在12 h内稳定性良好。
               200                 钩藤碱                     2.5.7  耐用性试验 （1）流动相中 pH 值变化的考察。
              mAU  150                                     取安义县钩藤样品粉末（批号：181206），按“2.3”项下方
               100
                50                                         法制备供试品溶液，流动相缓冲液的 pH 分别调整为
                0                                          1.8、2.3、2.8。在其他色谱条件不变，只改变流动相pH值
                  0    5   10   15   20   25   30
                                t，min                      的情况下，分别测定供试品中有效成分含量。结果，钩
                            B.混合对照品溶液
                                                           藤碱和异钩藤碱含量的 RSD 分别为 4.8％和 2.9％（n＝
               100                                         3）。表明在本试验条件下，流动相 pH 值的变化对测定
                80                                         结果影响不大。（2）不同色谱柱的考察。取安义县钩藤
                                  异钩藤碱
              mAU  60              钩藤碱                     样品粉末（批号：181206），按“2.3”项下方法制备供试品
                40
                                                           溶液，色谱柱分别为 Dikmatech Diamonsil Plus C18、Hy-
                20
                                                           persil ODS C18、Agilent HC- C18，在流动相及其他色谱条
                0
                                                           件不变，只改变色谱柱的情况下，分别测定供试品中有
                  0    5   10   15   20   25   30
                                t，min                      效成分含量。结果，钩藤碱和异钩藤碱含量的RSD分别
                             C.供试品溶液
                                                           为4.3％和3.1％（n＝3），表明在本试验条件下，不同色谱
                 图4 3种溶液的高效液相色谱图                           柱对测定结果影响较小。（3）不同品牌高效液相色谱仪
          Fig 4 HPLC chromatograms of 3 kinds of solution
                                                           的考察。取安义县钩藤样品粉末（批号：181206），按
        2.5.2  线性关系考察       精密称取钩藤碱对照品9.86 mg             “2.3”项下方法制备供试品溶液，分别采用 Agilent1260、
        和异钩藤碱对照品 9.97 mg，置于同一 25 mL 量瓶中，加                  Shimadzu LC-20AT、Waters e26953 HPLC 仪对供试品中
        乙醇溶解并稀释至刻度得混合对照品母液；再逐步稀释                           有效成分进行含量测定，其他色谱条件不变。结果，钩
        成 6 份，得钩藤碱质量浓度分别为 157.76、78.88、39.44、              藤碱和异钩藤碱含量的 RSD 分别为 3.7％和 2.6％（n＝
        19.72、9.86、4.93 μg/mL 的溶液，以及异钩藤碱质量浓度               3）。表明在本试验条件下，不同品牌的HPLC仪对测定
        分别为159.50、79.76、39.88、19.44、9.97、4.98 μg/mL的溶      结果影响较小。
        液。各取 10 μL 注入液相色谱仪，记录色谱图。以对照                       2.5.8  加样回收率试验          取安义县钩藤样品粉末（批
        品峰面积为纵坐标（y），以对照品质量浓度为横坐标（x）                        号：181206）6份，每份各约0.25 g，精密称定，分别置于具
        绘制标准曲线，得钩藤碱和异钩藤碱回归方程分别为                            塞锥形瓶中，分别精密加入 0.315 5 mg/mL 的钩藤碱和
        y＝2.603 9×10 x－31.562（r＝0.999 9）、y＝2.643×10 x+     0.398 8 mg/mL 的异钩藤碱各 1.0 mL，按“2.3”项下方法
                    4
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        中国药房    2019年第30卷第21期                                             China Pharmacy 2019 Vol. 30 No. 21  ·2955  ·
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