Page 71 - 2019年11月第30卷第21期

液相色谱-质谱联用法测定人血浆中氯吡格雷及其3种代谢产物

的浓度 Δ

刘职瑞 ，姚 璞，杨 波，王 瑜，冯 伟，孙凤军（陆军军医大学第一附属医院药剂科，重庆 400038）
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中图分类号 R969.1 文献标志码 A 文章编号 1001-0408（2019）21-2946-06
DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2019.21.14

摘 要 目的：建立同时测定人血浆中氯吡格雷（CLP）及其中间代谢产物2-氧-氯吡格雷（2-O-CLP）、非活性代谢产物氯吡格雷羧
酸代谢物（CLPCA）和活性代谢产物氯吡格雷硫醇代谢物（CLPTM）浓度的方法。 方法：选取陆军军医大学第一附属医院确诊为
脑卒中的90名患者，早晨空腹口服1片氯吡格雷片（75 mg/片），于服药2 h后采集血样，将CLPTM经2-溴-3’-甲氧基苯乙酮衍生形
成CLPTM-D后与其余3种待测物一起通过乙腈蛋白沉淀提取后，采用液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）测定其浓度。色谱柱为
Agilent poroshell 120 EC-C18，流动相为0.1％甲酸的乙腈溶液-0.1％甲酸水溶液（90 ∶ 10，V/V），采用多反应监测模式进行正离子检
测，检测离子对分别为 CLPCA 质荷比（m/z）308.1→198.1、CLP m/z 322.3→212.0、2-O-CLP m/z 338.3→155.0、CLPTM-D m/z
504.4→354.1、内标噻氯吡啶 m/z 264.0→154.1。结果：CLPCA、CLP、2-O-CLP、CLPTM-D 和内标的保留时间分别为 2.01、3.32、
2.83、2.68、1.87 min，CLPCA、CLP、2-O-CLP、CLPTM-D 检测质量浓度的线性范围分别为 100～10 000、0.2～20、0.3～30、0.5～50
ng/mL（r 均≥0.999 5），日内、日间精密度试验的 RSD 均≤9.5％（n＝5），准确度为 93.5％～98.9％（n＝5），提取回收率为 85.4％～
95.9％（n＝5），基质效应的 CV 为 2.7％～6.2％（n＝5）。稳定性（－80 ℃放置 3 个月、3 次冷冻-解冻循环、4 ℃放置 8 h）试验中，
CLPCA、CLP、2-O-CLP和CLPTM-D的RE均≤10.0％（n＝5）。结论：建立的LC-MS/MS法特异性强，测定结果准确可靠，可用于
检测人血浆中CLP及其3种代谢产物的浓度。
关键词 液相色谱-串联质谱法；氯吡格雷；代谢产物；血浆浓度

Determination of Clopidogrel and Its Three Metabolites Concentrations in Human Plasma by LC-MS/MS
LIU Zhirui，YAO Pu，YANG Bo，WANG Yu，FENG Wei，SUN Fengjun（Dept. of Pharmacy，the First Affiliated
Hospital of Army Medical University，Chongqing 400038，China）

ABSTRACT OBJECTIVE：To establish the method for simultaneous determination of clopidogrel （CLP），its intermediate
metabolite（2-O-CLP），inactive metabolite（CLPCA）and active metabolite（CLPTM）in human plasma. METHODS：Totally 90
patients diagnosed as stroke were selected from the First Affiliated Hospital of Army Medical University. They were given one CLP
tablet（75 mg/tablet）orally on an empty stomach in the morning. Blood samples were collected 2 h after taking the tablet. CLPTM-
D was formed by derivation of CLPTM with 2-bromo-3’-methoxyacetophenone and extracted by precipitation of acetonitrile protein
together with the other three substances to be measured. LC-MS/MS method was adopted. The determination was performed on
Agilent poroshell 120 EC-C18 column with mobile phase consisted of acetonitrile（0.1％ formic acid）and water（0.1％ formic acid）
（90 ∶ 10，V/V）. The quantitation analysis was performed using multiple reaction monitoring at the specific ion transitions of m/z
308.1→198.1 （CLPCA）， 322.3→212.0 （CLP）， 338.3→155.0 （2-O-CLP）， 504.4→354.1 （CLPTM-D） and 264.0→154.1
（ticlopidine，internal standard），respectively. RESULTS：The retention time of CLPCA，CLP，2-O-CLP，CLPTM-D and internal
standard were 2.01，3.32，2.83，2.68，1.87 min，respectively. The linear range of CLPCA，CLP，2-O-CLP and CLPTM-D were
100-10 000，0.2-20，0.3-30，0.5-50 ng/mL（all r≥0.999 5）. The intra-day and inter-day RSD were all less than 9.5％（n＝5）.
Accuracy ranged from 93.5％-98.9％（n＝5），and extraction recovery was from 85.4％ to 95.9％（n＝5）. The matrix effect ranged
from 2.7％-6.2％（n＝5）. In stability tests（storing at －80 ℃ for 3 months，3 freeze-thaw cycles，storing at 4 ℃ for 8 h），RE of
CLP，CLPCA and CLPTM-D were all lower than 10.0％ （n＝5）. CONCLUSIONS：Established LC-MS/MS method has the
advantages of high specificity，accuracy and reliability，and can be used to detect the concentration of CLP and its three
metabolites in human plasma.
KEYWORDS LC-MS/MS；Clopidogrel；Metabolites；Plasma concentration

氯吡格雷（Clopidogrel，CLP）是临床广泛使用的血
Δ 基金项目：重庆市社会事业与民生保障科技创新专项（No.
cstc2016shms-ztzx10004） 小板受体抑制剂，主要用于脑卒中、急性冠状动脉综合
＊主管药师。研究方向：药动学。电话：023-68765991。E-mail： 征等循环障碍疾病的治疗。CLP为前体药物，本身不具
zhirui_liu2013@163.com
活性，需经过代谢转化为活性形式才能发挥抗血小板作
# 通信作者：副主任药师，博士。研究方向：治疗药物浓度监测。
电话：023-68765991。E-mail：fengj_sun@163.com 用。CLP经口服吸收后在肝脏内迅速代谢，其中约85％

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