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甘草 。甘草中的主要活性物质甘草酸不仅在心血管疾                           2.3 溶液的制备
            [2]
        病的防治方面具有非常重要的作用 ，还是常规的保肝药                          2.3.1  对照品溶液的制备          精密称取硝苯地平对照品
                                     [3]
                                                     [4]
        物，临床上常用来治疗硝苯地平等药物引起的肝损伤 。                          3.0 mg，置于 10 mL 量瓶中，以甲醇溶解并稀释至刻度，
        本实验初步探讨了甘草酸对大鼠体内硝苯地平药动学                            混匀，得到质量浓度为 0.3 mg/mL 的硝苯地平贮备液。
        的影响，以期为临床合理应用甘草酸制剂治疗硝苯地平                           准确称取甘草酸对照品 10.0 mg，置于 10 mL 量瓶中，
        引起的肝损伤提供参考。                                        用甲醇溶解并稀释至刻度，混匀，得到质量浓度为 1.0
        1 材料                                               mg/mL的甘草酸贮备液。上述溶液均置于冰箱2～8 ℃
        1.1 仪器                                             保存备用。
            LC-20 高效液相色谱仪（包括 LC-20A 真空在线脱                  2.3.2  内标溶液的制备         精密称取地西泮对照品 1.00
        气机、LC-20AT四元泵、CTO-10 AS柱温箱、SPD-M20 A               mg，置于 100 mL 量瓶中，用适量甲醇溶解并稀释至刻
        检测器）和 AUY120 电子天平均购自日本 Shimadzu 公                  度，混匀，得到质量浓度为 10.0 μg/mL 的内标贮备液。
        司；5427R离心机（德国艾本德公司）；VX-Ⅲ涡旋混合器                      精密量取内标贮备液 1.00 mL，置于 100 mL 量瓶中，用
                                                           适量甲醇溶解并稀释至刻度，混匀，得到质量浓度为
       （北京踏锦科技有限公司）；BF-2000氮气吹干仪（北京八
                                                           100 ng/mL的内标溶液，置于冰箱2～8 ℃保存备用。
        方世纪科技有限公司）；HPX-9052MBE 恒温烘箱（上海
                                                           2.4 血浆样品的处理
        博讯医疗设备厂）。
                                                               精密量取待测血浆样品 200 μL，置于 1.5 mL EP 管
        1.2 药品与试剂
                                                           中，加入10 μL内标溶液（100 ng/mL），加入乙酸乙酯-环
            地西泮对照品（内标，美国 Sigma-Aldrich 公司，批
                                                           己烷混合液（3 ∶ 1，V/V） 1 mL 萃取，涡旋 1 min，4 000
                                                                                [7]
        号：439-14-5，纯度：99.7％）；甘草酸对照品和硝苯地平
                                                           r/min 离心 5 min。取上清液 0.8 mL，置于干净的 EP 管
        对照品（阿拉丁公司，批号：1405-86-3、21829-25-4，纯
                                                           中，55 ℃水浴加热，N2吹干，并将残余物用 100 μL 流动
        度：99.73％、99.76％）；甲醇（国药集团化学试剂有限公
                                                           相复溶，取20 μL上清液进样分析。
        司，批号：67-56-1，色谱级）；羧甲基纤维素钠（CMC-Na，
                                                           2.5  色谱条件
        批号：C8621-25g）和肝素钠（批号：9041-08-1）均购自北
                                                               色谱柱：ODS-C18 （250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：
        京索莱宝科技有限公司；乙酸乙酯和环已烷均为分析
                                                           甲醇-水（62∶38，V/V，乙酸调pH为4.5）；流速：1.0 mL/min；
        纯，水为超纯水。
                                                           柱温：30 ℃；检测波长：238 nm；进样量：20 μL。
        1.3  动物
                                                           2.6  专属性试验
            SD大鼠，SPF（无特定病原体）级，♀，2月龄，体质量
                                                               取空白血浆、加硝苯地平的空白血浆、大鼠灌胃后
       （210±20）g，由安徽医科大学实验动物中心提供，动物
                                                           12 h 时的给药血浆各 1 份，按照“2.4”项下方法处理后
        使用许可证号：SYXK（皖）2017-006。所有大鼠饲养在
                                                           （其中空白血浆不加内标溶液），再按照“2.5”项下色谱条
        温度、湿度、灯光受调控的房间，给予正常饮食，在标准
                                                           件进样测定，记录色谱。结果显示，硝苯地平和地西泮
        环境饲养2周后开始实验。
                                                           的保留时间分别为9.6、5.9 min，血浆里的杂质不影响硝
        2 方法与结果                                            苯地平的测定，硝苯地平和地西泮可以完全分离，峰形
        2.1  分组与给药                                         良好，可见本方法具有专属性高、分离度好的特点，可以
            将大鼠随机分成对照组和实验组，每组10只。实验                        准确测定硝苯地平的浓度。色谱图见图1。
        组大鼠灌胃甘草酸 5 mg/kg （溶剂为 0.5％CMC-Na 溶                 2.7 线性关系与定量下限的考察
                                [5]
        液，给药剂量按临床成人常用剂量换算），对照组大鼠灌                              将200 μL空白血浆，置于离心管中，加入10 μL内标
        胃等量的0.5％CMC-Na溶液，每日1次，连续14 d。第13                   溶液（100 ng/mL），再分别加入50 μL不同质量浓度的硝
        天夜里，将大鼠禁食过夜（晚上10：00－第2天白天实验                        苯地平对照品溶液至终浓度分别为 20、40、80、160、320
        前），但是自由饮水，于第14天灌胃30 min后，实验组和                      ng/mL。再按照“2.4”项下方法处理后（不再加内标溶
                                          [6]
        对照组大鼠同时灌胃硝苯地平 3 mg/kg （溶剂为 0.5％                    液），按“2.5”项下色谱条件进样测定，记录峰面积。以硝
        CMC-Na溶液，给药剂量按临床成人常用剂量换算）。                         苯地平质量浓度为横坐标（x），以硝苯地平与内标峰面
        2.2 样品采集                                           积比值的均数为纵坐标（y），采用加权最小二乘法进行
            分别于给予硝苯地平前和给药后 0.25、0.5、0.75、1、                线性回归分析，得回归方程为 y＝0.011x－0.006 6（r＝
        1.5、2、3、4、6、8、12、24 h从眼内眦取血0.5 mL，置于预先             0.999 4），硝苯地平的检测质量浓度在20～320 ng/mL线
        加入肝素钠的试管中，4 ℃下 3 000 r/min 离心 10 min，              性范围内与峰面积呈良好的线性关系。以信噪比值＝
        －20 ℃冷冻保存备用。                                       10确定的定量下限为5 ng/mL。


        中国药房    2019年第30卷第21期                                             China Pharmacy 2019 Vol. 30 No. 21  ·2943  ·
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