Page 52 - 2019年11月第30卷第21期
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针对这种情况，本研究设计了一种聚合物胶束作为                         批号：0010316）；MTT（北京博奥拓达科技有限公司，批
        抗肿瘤药物的载体。这种载体以碳二亚胺为交联剂，首                           号：C18H16N5SBR，纯度：＞98％）；其他试剂均为分
        先使壳聚糖（CSO）上的氨基与硬脂酸（SA）上的羧基发                        析纯。
        生化学反应，得到两亲性的CSO-SA胶束，并利用端醛基                        1.3 细胞
        化聚乙二醇（mPEG）上的端醛基与 CSO 上的氨基发生                           人肝癌细胞HepG2购自上海细胞生物学研究所，由
        席夫碱反应得到PEG-CSO-SA胶束，以减少巨噬细胞对                       承德医学院基础医学院中心实验室细胞库培养保种。
        聚合物胶束的摄取，增加其在体内的循环时间，再利用                           2 方法与结果
        此化合物上残留的氨基与叶酸（FA）末端的羧基，经碳二                         2.1 FA-PEG-CSO-SA胶束的制备
        亚胺偶联发生化学反应，最终得到两亲性 FA-PEG-                         2.1.1 CSO-SA胶束的制备         精密称取0.5 g CSO，溶于
        CSO-SA 纳米胶束，以增加所载药物对肿瘤细胞的主动                        40 mL 去离子水中，于 80 ℃保温溶解 1 h。将 0.45 g SA
        靶向性。由于FA-PEG-CSO-SA 具有独特的核-壳结构，                    和2.88 g碳二亚胺溶于60 mL无水乙醇中，于60 ℃，400
        其内核可通过疏水作用力包载疏水性的小分子抗肿瘤                            r/min电磁搅拌30 min。将SA和碳二亚胺的混合无水乙
        药物。蛇床子素（Osthol，OST）属于难溶性抗肿瘤药物，                     醇溶液缓慢滴加到CSO的去离子水溶液中，于400 r/min
        本研究以 OST 为模型药，将其包载于 FA-PEG-CSO-SA                  电磁搅拌 6 h。反应结束后，将反应产物以再生纤维素
        中制备成 FA-PEG-CSO-SA/OST 纳米胶束，并比较 OST                透析袋（分子量：3 500 Da，下同）透析 48 h，持续换水除
        溶液与 FA-PEG-CSO-SA/OST 对人肝癌细胞 HepG2 的               去水溶性副产物。透析后的反应产物冻干，然后以乙醇
        抑瘤作用。                                              洗涤3次，除去未反应的SA。最后将反应产物以去离子
        1 材料                                               水溶解，冻干，即得0.39 g的CSO-SA胶束。
        1.1  仪器                                            2.1.2 PEG-CSO-SA 胶束的制备          精密称取 CSO-SA
            LGJ-22D型冷冻干燥机（北京四环科学仪器厂有限                      51.0 mg、mPEG 19.0 mg溶于40 mL去离子水中，探头超
        公司）；GT16-3型高速台式离心机（北京时代北利离心机                       声（功率：400 W，工作2 s，停3 s）20次，室温下400 r/min
        有限公司）；Agilent1260型高效液相色谱仪（美国安捷伦                    磁力搅拌过夜，终反应液置于再生纤维素透析袋中，以
        公司）；JY92-IIN型超声波细胞粉碎机（宁波新芝生物科                      去离子水透析 24 h，样品冻干，即得 0.18 g 的 PEG-CSO-
        技股份有限公司）；ZEN3690 型微粒粒度与表面电位测                       SA胶束。
        定仪（英国马尔文公司）；JA2003 型电子天平（上海精科                      2.1.3 FA-PEG-CSO-SA 胶束的制备         称取 1.2 mg FA，
        天平仪器有限公司）；KQ2200DE 型数控超声波清洗仪                       以 10 mL 无水 DMSO 溶解，再加入 2.1 mg 碳二亚胺，充
       （昆山市超声仪器有限公司）；FTIR-1500型傅立叶红外光                      分溶解反应 4 h，得到 FA 活性酯的 DMSO 溶液。称取
        谱仪（日本岛津公司）；H-100 型透射电镜（日本日立公                       20.0 mg PEG-CSO-SA溶于10 mL去离子水中，400 r/min
        司）；EASY20型超纯水仪（上海康雷分析仪器有限公司）。                      磁力搅拌条件下缓慢加入 FA 活性酯的 DMSO 溶液，室
        1.2  药品与试剂                                         温下避光反应 24 h。终反应液置于再生纤维素透析袋
            CSO（济 南 海 得 贝 海 洋 生 物 工 程 公 司 ，批 号 ：           中，以去离子水透析 72 h，透析液冷冻干燥，即得 20.50
        180306，分子量：5 000 Da，脱乙酰度：＞85％）；碳二亚胺                mg 的 FA-PEG-CSO-SA 胶束。FA-PEG-CSO-SA 的制备
       （上 海 吉 尔 科 技 生 物 有 限 公 司 ，批 号 ：GLS180326-           路线图见图1。
        00805）；SA（天津市东丽区天大化学试剂厂，批号：                        2.2  红外光谱结构表征
        20000704）；mPEG（上海子起科技生物有限公司，批号：                        称 取 CSO、SA、CSO-SA，PEG-CSO-SA 以 及 FA-
        WYF-XC-90-6，分子量：2 000 Da）；OST 原料药（西安天              PEG-CSO-SA 样品各 2.0 mg，与溴化钾混匀研成粉末后
        本生物工程有限公司，批号：TBSC20180504-5，纯度：≥                   压制成片，测定红外光谱图，对聚合物胶束的特征官能
        98％）；三硝基苯磺酸（TNBS，合肥博美生物科技有限责                       团进行红外光谱分析。CSO、SA、CSO-SA、PEG-CSO-
        任公司，批号：2508-19-2，纯度：≥99％）；FA（西格玛奥                  SA和FA-PEG-CSO-SA的红外光谱图见图2。
        德里奇贸易有限公司，批号：WXBB4821V）；芘（美国Al-                        由图 2 显示，SA 中的羧基与 CSO 的氨基形成酰胺
        drich Chem 公司）；无水乙醇（杭州长征化工厂，批号：                    键后，SA中羧酸的羰基由1 701.22 cm 移至CSO-SA中
                                                                                            －1
                                                                                －1
        20180401）；碳 酸 氢 钠（上 海 化 学 试 剂 厂 ，批 号 ：             酰胺键羰基 1 631.30 cm ，同时 CSO-SA 中还出现酰胺
        20120909）；二甲基亚砜[DMSO，萨恩化学技术（上海）有                   键的特征吸收峰 1 401.70 cm       － 1  和 1 385.50 cm ，表明
                                                                                                    － 1
        限公司，批号：FH220131]；0.25％胰酶（批号：2053591）、              CSO的氨基与SA的羧基发生了反应。与CSO-SA红外
        青霉素（批号：25200-056）、链霉素（批号：15140-122）、               光谱比较，在PEG-CSO-SA中，1 466.10 cm 和1 426.40
                                                                                                －1
        DMEM 高糖培养基（批号：81190101）和磷酸盐缓冲液                     cm 为mPEG与CSO-SA中的氨基进行了席夫碱反应而
                                                              －1
       （批号：8117170）均购自赛默飞世尔（苏州）仪器有限公                       产生的席夫碱键的吸收峰，表明 mPEG 已经与 CSO-SA
        司；胎牛血清（以色列贝尔特谢克生物工业有限公司，                           发生了化学反应，得到了 PEG-CSO-SA。在 FA-PEG-


        中国药房    2019年第30卷第21期                                             China Pharmacy 2019 Vol. 30 No. 21  ·2927  ·
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