Page 54 - 2019年9月第30卷第18期

采用UPLC-MS/MS法研究树豆酮酸A在不同种属肝微粒体中的

代谢差异 Δ

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张 丽 ，蔡 进 ，班玉娟 ，朱高峰 ，陈 瑞 ，王建塔 ，汤 磊 ，黄 静 （1.贵州医科大学药学院，贵阳
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550004；2.贵州省化学合成药物研发利用工程技术研究中心，贵阳 550004）
中图分类号 R917；R969.1 文献标志码 A 文章编号 1001-0408（2019）18-2497-06
DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2019.18.09
摘 要 建立测定肝微粒体孵育体系中树豆酮酸A（CAA）质量浓度的方法，并比较其在不同种属肝微粒体中的代谢特征。方法：
分别将CAA溶解于由还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADPH）启动的大鼠、比格犬、人肝微粒体孵育体系中，置于37 ℃水浴
中进行孵育，分别于孵育的0、5、10、15、30、45、60 min时用乙腈终止反应，以染料木素为内标，采用超高效液相色谱-串联质谱法
（UPLC-MS/MS）检测各孵育体系中CAA的质量浓度。色谱柱为Waters BEH C18，流动相为水（含0.1％甲酸）-乙腈（含0.1％甲酸）
（45 ∶ 55，V/V），流速为0.25 mL/min，柱温为30 ℃，进样量为2 μL；采用电喷雾离子源，以选择反应监测模式进行负离子扫描，用于
定量分析的离子对分别为m/z 353.14→309.11（CAA）、m/z 269.86→224.11（内标）。以孵育0 min时CAA的质量浓度为参照，计算
其在不同孵育体系中的剩余百分比和酶动力学参数。结果：CAA 检测质量浓度的线性范围为 0.05～20 μg/mL，定量下限为
0.05 μg/mL，最低检测限为0.01 μg/mL；日内、日间RSD均小于10％，相对误差为－4.83％～8.94％，提取方法和基质效应均不影响
待测物的测定。孵育 60 min 时，CAA 在大鼠、比格犬、人肝微粒体中的剩余百分比分别为（62.79±9.99）％、（64.07±11.59）％、
（96.66±5.71）％；在大鼠、比格犬肝微粒体中的半衰期（72.19、68.61 min）均显著短于人肝微粒体（364.74 min），清除率[0.019 2、
0.020 2 mL/（min·mg）]均显著高于人肝微粒体[0.003 8 mL/（min·mg）]（P＜0.05）。结论：本研究建立的 UPLC-MS/MS 法简便、快
速、专属性强、灵敏度高，可用于肝微粒体孵育体系中CAA质量浓度的测定及体外代谢稳定性的研究。CAA在大鼠、比格犬肝微
粒体中的代谢稳定性均差于人肝微粒体。
关键词 树豆酮酸A；超高效液相色谱-串联质谱法；肝微粒体；不同种属；体外代谢稳定性

Study on Metabolic Differences of Cajanonic Acid A in Different Species of Liver Microsomes by
UPLC-MS/MS
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ZHANG Li ，CAI Jin ，BAN Yujuan ，ZHU Gaofeng ，CHEN Rui ，WANG Jianta ，TANG Lei ，HUANG Jing 1
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（1. School of Pharmacy， Guizhou Medical University， Guiyang 550004， China； 2. Guizhou Provincial
Engineering Technology Research Center for Chemical Drug R&D，Guiyang 550004，China）
ABSTRACT OBJECTIVE：To establish a determination method for the concentration of cajanonic acid A （CAA） in liver
microsome incubation system，and to compare the metabolism characteristics of it in different species of liver microsomes.
METHODS：CAA was dissolved in liver microsome incubation system of rat，Beagle dog and human initiated by reduced
nicotinamide adenine dinucleotide phosphate（NADPH），and was incubated in water at 37 ℃. The reaction was terminated with
acetonitrile at 0，5，10，15，30，45 and 60 min，respectively. Using genistein as internal standard，the concentration of CAA in
different incubation systems was determined by UPLC-MS/MS. The determination was performed on Waters BEH C18 column with
mobile phase consisted of water（containing 0.1％ formic acid）-acetonitrile（containing 0.1％ formic acid）（45 ∶ 55，V/V）at the
flow rate of 0.25 mL/min. The column temperature was 30 ℃，and the sample size was 2 μL. The electrospray ionization source
was used to the select reaction monitoring mode for negative ion scanning. The ion pairs for quantitative analysis were m/z 353.14→
309.11（CAA），m/z 269.86→224.11（internal standard）respectively. The residual percentage and enzymatic kinetic parameters of
CAA in different incubation systems were calculated according
Δ 基金项目：国家自然科学基金资助项目（No.81660573）；贵州省
to the mass concentration of CAA at 0 min. RESULTS：The
科技计划项目（No.黔科合支撑[2017]2842、黔科合支撑[2017]2839、黔
科合 LH 字[2016]7379）；贵州省高层次创新型人才培养项目[No.黔科 linear range of CAA was 0.05-20 μg/mL；the limit of quanti-
合人才（2016）4015 号]；贵州省卫生计生委科学技术基金项目（No.gz- tation was 0.05 μ g/mL，and the lowest detection limit was
wjkj2017-1-010）；贵州省普通高等学校科技拔尖人才支持计划（No.黔 0.01 μg/mL. RSDs of intra-day and inter-day were lower than
教合KY字[2017]072）；贵阳市科技计划项目（No.筑科合同[2017]5-7号） 10％ ； relative errors ranged － 4.83％ -8.94％ ； extraction
＊硕士研究生。研究方向：创新型化合物的药动学。E-mail：
method and matrix effect did not affect the determination of
576048657@qq.com
the substance to be measured. At 60 min of incubation，
# 通信作者：副教授，硕士生导师，硕士。研究方向：药物新剂型、
新技术及药动学。电话：0851-86550366。E-mail：1104849720@qq. residual percentages of CAA in rat，Beagle dog and human
com liver microsomes were（62.79 ± 9.99）％ ，（64.07 ± 11.59）％ ，

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