Page 50 - 2019年9月第30卷第18期

顺片）5 g，置于同一2 000 mL 圆底烧瓶中，加水800 mL， 苓酸的定量限分别为 0.155、0.590、1.210、1.112、1.070、
浸泡 30 min，回流提取 2 次，每次 30 min，趁热纱布滤 0.258、0.553、0.421、0.153、0.354、0.431 μg/mL，检测限分
过，合并滤液，减压浓缩至约40 mL，放置室温，加水定容 别 为 0.047、0.179、0.134、0.337、0.324、0.078、0.168、
至 50 mL，摇匀，即得。共制备 3 批真武汤样品（编号： 0.128、0.046、0.107、0.131 μg/mL。
S1、S2、S3）。 3 7
150
2.3 溶液的制备 mAU 100 2
2.3.1 混合对照品溶液 取 5-羟甲基糠醛、（+）-儿茶 50 0 1 4 5 6 8 9 10 11
素、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱、苯甲酰芍药 10 20 30 40 50 60 70 80
t，min
苷、6-姜酚、8-姜酚、白术内酯Ⅱ、6-姜烯酚、茯苓酸对照 A.混合对照品
品适量，分别置于10 mL量瓶中，加甲醇溶解并定容，摇 150 3 7
匀，得 5-羟甲基糠醛、（+）-儿茶素、苯甲酰乌头原碱、苯 mAU 100 2 6 11
50
甲酰次乌头原碱、苯甲酰芍药苷、6-姜酚、8-姜酚、白术内 0 1 4 5 8 9 10
10 20 30 40 50 60 70 80
酯Ⅱ、6-姜烯酚、茯苓酸质量浓度分别为270.25、1 179.5、 t，min
1 066.25、1 127.75、1 335.75、1 416.50、343.75、216.00、 B.供试品
115.50、469.50 µg/mL 的单一对照品贮备液。另取芍药 150 7
100
苷对照品适量，置于5 mL量瓶中，分别加入上述各单一 mAU 50 11
1 4 5 8 9 10
对照品贮备液适量，加甲醇定容，摇匀，得含5-羟甲基糠 0
10 20 30 40 50 60 70 80
醛、（+）-儿茶素、芍药苷、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌 t，min
C.缺白芍阴性样品
头原碱、苯甲酰芍药苷、6-姜酚、8-姜酚、白术内酯Ⅱ、6-
姜烯酚、茯苓酸质量浓度分别为 12.47、47.25、4 016、 150 3 7
100
89.04、85.54、103.13、110.66、16.89、12.04、10.62、20.78 mAU 50 2 4 5 6
0 1 8 9 10
µg/mL的混合对照品溶液。
10 20 30 40 50 60 70 80
2.3.2 供试品溶液 精密量取“2.2”项下样品 3 mL，置 t，min
D.缺茯苓阴性样品
于5 mL量瓶中，加甲醇定容，摇匀，室温放置12 h，再摇
150 3
匀，经0.22 μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。 100 7
2.3.3 阴性样品溶液 按“2.2”项下方法分别制备缺白 mAU 50 2 4 5 6 11
0 9 10
芍、茯苓、白术、附子（黑顺片）、生姜的阴性样品，再按 10 20 30 40 50 60 70 80
“2.3.2”项下方法分别制备各阴性样品溶液。 t，min
E.缺白术阴性样品
2.4 系统适用性试验
150 3 7
精密量取“2.3”项下混合对照品溶液、供试品溶液和 100
阴性样品溶液各适量，按“2.1”项下色谱条件进样测定， mAU 50 1 2 6 89 10 11
0
记录色谱图，详见图 1。由图 1 可知，在该色谱条件下， 10 20 30 40 50 60 70 80
各成分均能达到基线分离，分离度均大于1.5，理论板数 t，min
F.缺附子（黑顺片）阴性样品
以6-姜酚峰计均不低于5 000，阴性样品对测定无干扰。
150 3
2.5 线性关系考察 mAU 100
精密量取“2.3.1”项下混合对照品溶液 0.25、0.50、 50 1 2 4 5 6 9 11
0
1.0、2.0、4.0、5.0 mL，分别置于 5 mL 量瓶中，加甲醇定 10 20 30 40 50 60 70 80
t，min
容，摇匀，得系列线性关系工作溶液。精密量取上述系 G.缺生姜阴性样品
列线性关系工作溶液各20 µL，按“2.1”项下色谱条件进 注：1. 5-羟甲基糠醛；2.（+）-儿茶素；3. 芍药苷；4. 苯甲酰乌头原
样测定，记录峰面积。以各待测成分质量浓度（x，µg/mL） 碱；5. 苯甲酰次乌头原碱；6. 苯甲酰芍药苷；7. 6-姜酚；8. 8-姜酚；9. 白
术内酯Ⅱ；10. 6-姜烯酚；11. 茯苓酸
为横坐标、峰面积（y）为纵坐标进行线性回归，结果见
Note：1. 5-hydroxymethylfurfural；2.（+）-cianidanol；3. paeoniflo-
表1。
rin；4. benzoylaconitine；5. benzoylhypacoitine；6. benzoylpaeoniflo-
2.6 定量限与检测限考察 rin；7. 6-gingerol；8. 8-gingerol；9. atractylenolide Ⅱ；10. 6-shogaol；
取“2.3.1”项下混合对照品溶液适量，加甲醇倍比稀 11. pachymic acid
释，按“2.1”项下色谱条件进样测定，以信噪比10 ∶ 1、3 ∶ 1 图1 高效液相色谱图
分别计算定量限、检测限。结果，5-羟甲基糠醛、（+）-儿 Fig 1 HPLC chromatograms
茶素、芍药苷、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱、苯 2.7 精密度试验
甲酰芍药苷、6-姜酚、8-姜酚、白术内酯Ⅱ、6-姜烯酚、茯 取“2.3.1”项下混合对照品溶液适量，按“2.1”项下色

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