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生物样品定量分析的相关要求 ，详见表1。 质量浓度为参照，其余时间点的质量浓度与之相比计算
[13]
表1 精密度与准确度试验结果 底物剩余百分比。上述试验平行操作3次。使用Graph-
Tab 1 Results of accuracy and precision tests Pad Prism v7.0软件绘制CAA在不同种属肝微粒体孵育
理论质量浓 日内精密度（n＝5） 日间精密度（n＝15） RE， 体系中的平均剩余百分比-时间曲线，结果见图 3（由于
度，μg/mL 实测质量浓度（x±s），μg/mL RSD，％ 实测质量浓度（x±s），μg/mL RSD，％ ％ 其余时间点的实测值可能大于 0 h 时的实测值，故剩余
0.05 0.048±0.002 3.32 0.050±0.004 7.24 1.23 百分比可能超过100％）。
0.1 0.095±0.005 5.34 0.095±0.003 2.89 －4.83
2.5 2.723±0.029 1.07 2.724±0.155 5.17 8.94 150 人肝微粒体
10 10.813±0.136 1.26 10.811±0.512 4.69 8.11
大鼠肝微粒体
2.3.5 提取回收率与基质效应试验 按“2.3.3”项下方 比格犬肝微粒体
％ 100
法配制低、中、高质量浓度（0.1、2.5、10 μg/mL）QC样品，
再按“2.2.2”项下方法孵育 15 min 并处理，进样分析，记 平均剩余百分比，
录峰面积（A1 ）；按“2.2.1”项下方法制备经灭活的大鼠肝 50
微粒体孵育体系适量，再按“2.2.2”项下方法孵育15 min
并处理，随后加入CAA贮备液适量，使最终质量浓度与 0
0 20 40 60 80
上述 QC 样品对应，进样分析，记录峰面积（A2 ）；以甲醇 t，min
配制相应质量浓度且不含辅酶溶液的样品溶液，再按 图 3 CAA 在不同种属肝微粒体孵育体系中的平均剩
“2.2.2”项下方法孵育 15 min 并处理，进样分析，记录峰 余百分比-时间曲线
面积（A3 ）。各质量浓度平行操作 5 份。提取回收率＝ Fig 3 Average residual percentage-time curves of
（A1/A2 ）×100％，基质效应＝（A2/A3 ）×100％。结果，CAA CAA in different species of liver microsome in-
低、中、高质量浓度QC样品的提取回收率和基质效应均 cubation system
[13]
符合生物样品定量分析的相关要求 ，表明提取方法、基 将各时间点的平均剩余百分比的自然对数对孵育
质效应均不影响待测物的定量分析，详见表2。 时间作线性回归，求得斜率（k），根据公式①②计算酶动
表2 提取回收率与基质效应试验结果（n＝5） 力学参数（t1/2、CLint ） [14-15] ：
Tab 2 Results of extraction recovery and matrix ef- t1/2＝－0.693/k … … … … … … … … … … … … … … ①
fect tests（n＝5） CLint＝[（0.693/t1/2 ）×孵育液体积（mL）]/肝微粒体质
理论质量浓度， 提取回收率，％ 基质效应，％ 量（mg） …… … … … … … … … … … … … … … … … … … ②
待测物
μg/mL 结果（x±s） RSD 结果（x±s） RSD
CAA 0.1 94.86±3.23 3.41 92.89±7.27 7.82 参照如下标准判断CAA在不同种属肝微粒体中的
2.5 99.68±6.54 6.56 109.79±4.95 4.51 代谢稳定性：t1/2＜30 min，表明受试物代谢不稳定；t1/2为
10. 104.52±4.60 4.40 107.95±5.84 5.41 30～90 min，表明受试物代谢稳定性中等；t1/2＞90 min，
内标 2. 104.76±5.53 5.28 102.33±3.25 3.18
表明受试物代谢稳定性良好 。使用 GraphPad Prism
[16]
2.3.6 稳定性试验 按“2.3.3”项下方法配制 CAA 低、
v7.0 软件对数据进行统计分析。组间比较采用单因素
中、高质量浓度（0.1、2.5、10 μg/mL）QC 样品各 5 份，按
方差分析（One-way ANOVA）或 t 检验。P＜0.05 为差异
“2.2.2”项下方法孵育15 min并处理后，考察其在自动进
有统计学意义。结果，在以 NADPH 启动的Ⅰ相肝微粒
样器（8 ℃）内放置 6 h、室温放置 12 h、4 ℃冷藏 12 h、反
体孵育体系中，CAA 在大鼠、比格犬肝微粒体中的代谢
复冻融（－80 ℃～常温）3次的稳定性。结果，各样品实
稳定性一般，两者的 t1/2均显著短于人肝微粒体，CLint均
测质量浓度的 RSD 均小于 10％，表明其在上述条件下
显著高于人肝微粒体，差异均有统计学意义（P＜0.05），
稳定性良好，详见表3。
详见表4。
表3 稳定性试验结果（n＝5）
表 4 CAA 在不同种属肝微粒体孵育体系中的酶动力
Tab 3 Results of stability tests（n＝5）
学参数比较（n＝3）
进样器内放置6 h 室温放置12 h 冷藏12 h 反复冻融3次
理论质量浓 Tab 4 Comparison of enzyme kinetic parameters of
度，μg/mL 实测质量浓度 RSD， 实测质量浓度 RSD， 实测质量浓度 RSD， 实测质量浓度 RSD，
（x±s），μg/mL ％ （x±s），μg/mL ％ （x±s），μg/mL ％ （x±s），μg/mL ％ CAA among different species of liver micro-
0.1 0.101±0.004 3.50 0.099±0.003 3.37 0.101±0.004 3.50 0.100±0.003 3.47 some incubation system（n＝3）
2.5 3.131±0.137 4.38 2.991±0.167 5.59 2.958±0.153 5.19 3.131±0.137 4.38
10 10.856±0.546 5.03 11.283±0.567 5.03 11.150±0.633 5.67 11.710±0.427 3.64 肝微粒体种属 孵育60 min时的剩余百分比，％ t1/2，min CLint，mL/（min·mg）
大鼠 62.79±9.99 72.19 ＊ 0.019 2 ＊
2.4 CAA在大鼠、比格犬、人肝微粒体中的代谢稳定性
比格犬 64.07±11.59 68.61 ＊ 0.020 2 ＊
研究 人 96.66±5.71 364.74 0.003 8
按“2.2”项下方法进行体外代谢稳定性研究，采用底 注：与人肝微粒体比较，P＜0.05
＊
物消除法考察 CAA 的代谢情况。以 CAA 孵育 0 h 时的 Note：vs. human liver microsome， P＜0.05
＊
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