Page 74 - 2019年2月第30卷第4期

Ibr and 1，2，4 μmol/L Ibr-7 for 48 h，the number of cell clone formation was decreased significantly，while Ibr-7 groups were
significantly lower than same-dose Ibr groups（P＜0.01）. After treated with different doses of Ibr-7 for 24 or 16 h，total apoptosis
rate of cells（2，4，8 μmol/L），the proportion of cell mitochondrial membrane potential decrease（8 μmol/L），the relative protein
expression of Noxa（2，4，8 μmol/L）and Bax（8 μmol/L）were increased significantly，while the protein expression of PARP
（8 μ mol/L），Bcl-2 （4 μ mol/L），Mcl-1 （2，4，8 μ mol/L） were decreased significantly；above indexes （except for relative
expression of PARP and Bcl-2）of 8 μmol/L Ibr-7 group were significantly better than same-dose Ibr group（P＜0.05 or P＜0.01）.
There was no statistical significance in protein expression of Bcl-xL among those groups（P＞0.05）. CONCLUSIONS：Compared
with Ibr，Ibr-7 has better inhibitory and apoptotic effects on human pancreatic cancer Capan-2 cells in vitro，and has stronger
chemotherapeutic drug sensitization activity， the mechanism of which may be associated with reducing mitochondrial
transmembrane potential， down-regulating the protein expression of PARP， Bcl-2 and Mcl-1 and up-regulating the protein
expression of Noxa and Bax.
KEYWORDS Ibrutinib；Irutinil derivatives；Human pancreatic cancer Capan-2 cells；Proliferation；Apoptosis；Mitochondrial
transmembrane potential；Apoptosis-related protein

胰腺癌是目前临床患者5年生存率最低（仅为5％）的 1 材料
恶性肿瘤之一，因其发病隐匿，绝大多数患者在确诊时已 1.1 仪器
处于晚期；加之晚期胰腺癌极易复发、转移及药物耐受， SpectraMax M3 型全波长多功能酶标仪（美国 Mo-
使得其临床治疗处于瓶颈期 [1-2] 。吉西他滨作为胰腺癌 lecular Devices 公司）；FACSCanto Ⅱ型流式细胞仪（美
化疗的一线药物，其临床有效率仅为10％～15％ [3-4] 。尽 国BD公司）；Micro 21R型高速冷冻离心机、3111型细胞
管紫杉醇、伊立替康等药物的出现在一定程度上优化了 培养箱（美国 Thermo Fisher Scientific 公司）；ChemiDoc
胰腺癌的化疗方案，但其靶向药物的相关研究一直没有 XRS+型凝胶成像系统（美国 Bio-Rad 公司）；SZ61 型体
[5]
突破性进展 。因此，寻找有效的针对胰腺癌治疗的小 式显微镜（日本Olympus公司）。
分子靶向药物或合理的联合给药方案迫在眉睫。 1.2 药品与试剂
依鲁替尼（Ibr，结构式见图 1A）是作用于 B 细胞抗 Ibr 原料药（美国 Selleck 公司，批号：PCI-32765，纯
原识别受体（BCR）信号通路的新型小分子靶向药物，可 度：99.92％）；Ibr-7 原料药（杭州和正医药有限公司，批
靶向于 Bruton 酪氨酸激酶（Btk），目前已被美国 FDA 批 号：20161216，纯度：＞95％）；注射用盐酸吉西他滨（江
准用于慢性淋巴细胞白血病（CLL）、套细胞淋巴瘤 苏豪森药业集团有限公司，批号：160901，规格：0.2 g）；
（MCL）、华氏巨球蛋白血症（WM）、小淋巴细胞性淋巴 紫杉醇注射液（江苏奥赛康药业股份有限公司，批号：
瘤（SLL）和边缘区淋巴瘤（MZL）等 B 细胞恶性肿瘤的 E150101，规格：16.7 mL ∶ 100 mg）；RPMI 1640 培养基、
胎 牛 血 清（FBS）、0.25％ 胰 蛋 白 酶 - 乙 二 胺 四 乙 酸
临床治疗。近年多项临床前和临床研究均显示，Ibr对乳
（EDTA）消化液（美国Gibco公司，批号分别为1930017、
腺癌、前列腺癌、结肠癌等多种实体瘤均有较好的疗效，
1891605、1929955）；CCK-8检测试剂盒（美国MedChem-
但对胰腺癌细胞的体外抑制活性较差 [6-8] 。本课题组前
Express 公司，批号：30116）；二喹啉甲酸（BCA）蛋白定
期筛选发现，与 Ibr 比较，其衍生物 Ibr-7（结构式见图
量检测试剂盒（美国Thermo Fisher Scientific公司，批号：
1B）对胰腺癌细胞株具有更明显的体外抑制作用。在此
SI255483）；膜 联 蛋 白 Ⅴ - 异 硫 氰 酸 荧 光 素（Annexin
基础上，本研究考察了Ibr-7对人胰腺癌Capan-2细胞增
Ⅴ-FITC）/碘化丙啶（PI）细胞凋亡检测试剂盒（美国 BD
殖的影响，并初步探讨其可能机制，以期为胰腺癌治疗
公司，批号：6119908）；线粒体膜电位检测试剂盒（JC-1）
药物的开发和联合用药方案的设计提供新的治疗靶点
（碧云天生物技术研究所，批号：022618180620）；RIPA
和理论依据。
裂解液、5×Loading上样缓冲液（北京艾德莱生物科技有
限公司，批号分别为292343、291925AX）；10％蛋白电泳
通用型预制胶（12 孔）（杭州奥谦生物科技有限公司，批
号：C30621712）；聚偏二氟乙烯（PVDF）膜（0.45 μm，美
国 Millpore 公司，批号：R7E8785B）；免疫印迹化学发光
（ECL）试剂盒以及辣根过氧化酶（HRP）标记的羊抗兔
二抗、羊抗鼠二抗（美国 Abbkine 公司，批号分别为

A. Ibr B. Ibr-7 ATRFE2801、ATRFE0501、ATRFE2801）；三羟甲基氨基
图1 Ibr和Ibr-7的结构式 甲烷盐酸盐（TBST）（杭州昊鑫生物科技股份有限公司，
Fig 1 Structural formulas of Ibr and Ibr-7 批号：20180608XF；临用前加水 1 L 混匀，即得 TBST 溶

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