Page 73 - 2019年2月第30卷第4期

新型小分子激酶抑制剂 Ibr-7 对人胰腺癌 Capan-2 细胞的抑制作

用及机制研究 Δ

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1＊
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1，2 #
阎优优 ，张 博 ，张 琪 ，周冬梅 ，林能明 （1.浙江大学医学院附属杭州市第一人民医院转化医学研究中
2
心，杭州 310006；2.南京医科大学附属杭州第一医院转化医学研究中心，杭州 310006）
中图分类号 R966；R735.9 文献标志码 A 文章编号 1001-0408（2019）04-0499-08
DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2019.04.14
摘 要 目的：观察新型小分子激酶抑制剂Ibr-7[依鲁替尼（Ibr）衍生物]对人胰腺癌Capan-2 细胞的抑制作用及其可能机制。方
法：以Capan-2细胞为对象，采用CCK-8法检测1、2、4、8 μmol/L Ibr、Ibr-7作用48 h后的细胞增殖情况，计算细胞存活率；同法检测
1 μmol/L Ibr、Ibr-7对不同剂量吉西他滨/紫杉醇（均分别为0.062 5、0.125、0.25、0.5、1 μmol/L）的增敏作用。采用克隆形成试验检测
1、2、4 μmol/L Ibr、Ibr-7作用48 h后的细胞克隆形成情况，并记录细胞集落形成数量。采用流式细胞术或JC-1法检测2、4、8 μmol/L
Ibr-7 作用 24 或 16 h 后细胞凋亡情况和线粒体膜电位变化情况，并计算总凋亡率及细胞线粒体膜电位下降比例。采用 Western
blotting法检测细胞中相关凋亡蛋白[多聚二磷酸腺苷核糖聚合酶（PARP）、Noxa、Bcl-2、Bax、髓样细胞白血病1（Mcl-1）、B淋巴细
胞瘤xL（Bcl-xL）]的表达情况。结果：1、2、4、8 μmol/L Ibr、Ibr-7作用48 h后，细胞的存活率均显著下降，各剂量Ibr-7组均显著低于
同剂量Ibr组，且Ibr-7的半数抑制浓度显著低于Ibr（P＜0.05或P＜0.01）。联用Ibr、Ibr-7后，细胞的存活率均显著低于同剂量吉西
他滨/紫杉醇单用组，且Ibr-7联用组显著低于同剂量Ibr联用组（P＜0.05或P＜0.01）。经2、4 μmol/L Ibr以及1、2、4 μmol/L Ibr-7作
用48 h后，细胞集落形成数量均显著减少，且各剂量Ibr-7组均显著低于同剂量Ibr组（P＜0.01）。经不同剂量Ibr-7作用24或16 h
后，Capan-2 细胞的总凋亡率（2、4、8 μmol/L 组）、细胞线粒体膜电位下降比例（8 μmol/L 组）以及 Noxa（2、4、8 μmol/L 组）、Bax（8
μmol/L组）蛋白的相对表达量均显著上升，PARP（8 μmol/L组）、Bcl-2（4 μmol/L组）、Mcl-1（2、4、8 μmol/L组）蛋白的相对表达量均
显著下降，且8 μmol/L Ibr-7组上述指标（PARP、Bcl-2相对表达量除外）均显著优于同剂量Ibr组（P＜0.05或P＜0.01）。而各组细
胞Bcl-xL蛋白的相对表达量差异均无统计学意义（P＞0.05）。结论：与Ibr相比，Ibr-7对人胰腺癌Capan-2细胞具有更强的体外增
殖抑制作用和促凋亡作用，且具有更强的化疗药物增敏活性；其作用机制可能与降低细胞线粒体膜电位，下调细胞中 PARP、
Bcl-2、Mcl-1蛋白的表达，上调Noxa、Bax蛋白的表达有关。
关键词 依鲁替尼；依鲁替尼衍生物；人胰腺癌Capan-2 细胞；增殖；凋亡；线粒体膜电位；凋亡相关蛋白
Study on the Inhibitory Effects and Mechanism of New Small Molecular Kinase Inhibitors Ibr-7 on
Human Pancreatic Cancer Capan-2 Cells
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YAN Youyou ，ZHANG Bo ，ZHANG Qi ，ZHOU Dongmei ，LIN Nengming （1. Dept. of Transformational
1
1，2
2
2
Medicine Research Center，Hangzhou First People’s Hospital Affiliated to Zhejiang University School of
Medicine，Hangzhou 310006，China；2. Dept. of Transformational Medicine Research Center，Hangzhou First
Hospital Affiliated to Nanjing Medical University，Hangzhou 310006，China）
ABSTRACT OBJECTIVE：To observe the inhibitory effects and possible mechanism of new small molecular kinase inhibitors
Ibr-7 [Irutinil（Ibr）derivatives] on human pancreatic cancer Capan-2 cells. METHODS：Taking Capan-2 cells as objects，CCK-8
method was used to determine the proliferation of cells after treated with 1，2，4，8 μmol/L Ibr/Ibr-7 for 48 h. The survival rates of
cells were calculated. Sensitization effects of 1 μmol/L Ibr/Ibr-7 on different doses of gemcitabine/paclitaxel（0.062 5，0.125，0.25，
0.5，1 μmol/L）were detected. Clone formation test was used to detect the situation of cell clone formation after treated with 1，2，
4 μmol/L Ibr/Ibr-7 for 48 h. The number of cell colony formation was recorded. Flow cytometry or JC-1 method was used to detect
the apoptosis of cells after treated with 2，4，8 μmol/L Ibr-7 for 24 or 16 h and the changes of mitochondrial transmembrane
potential；total apoptotic rate and the percentage of mitochondrial membrane potential decrease were calculated. Western blotting
was used to detect the expression of related apoptotic protein （PARP，Noxa，Bcl-2，Bax，Mcl-1，Bcl-xL）. RESULTS：After
treated with 1，2，4，8 μmol/L Ibr/Ibr-7 for 48 h，the survival rates of cells were decreased significantly；those of Ibr-7 groups
were significantly lower than those of same-dose Ibr groups；
Δ 基金项目：杭州市省市共建医学重点学科建设计划项目（No.浙
卫办〔2018〕2号）；杭州市医学重点学科建设补助资金资助项目（No.杭 IC50 of Ibr-7 was significantly lower than that of Ibr（P＜0.05
卫计发〔2017〕68号、杭财社会〔2017〕20号） or P＜0.01）. After combined with Ibr/Ibr-7，the survival rate
＊药师。研究方向：肿瘤药理学。电话 0571-56007664。E-mail： of cells was significantly lower than that of same-dose
you.881022@163.com gemcitabine/paclitaxel alone group，and the Ibr-7 combination
# 通信作者：主任药师，教授，博士生导师。研究方向：临床药理 group was significantly lower than same-dose Ibr combination
学、临床毒理学。电话：0571-56007809。E-mail：lnm1013@163.com group（P＜0.05 or P＜0.01）. After treated with 2，4 μmol/L

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